诱导小鼠多囊卵巢综合征的改良技术

摘要

该方案介绍了一种通过使用微型泵控制来曲唑释放在小鼠中诱导多囊卵巢综合征 （PCOS） 模型的技术。在充分麻醉下，皮下植入微型泵，在微型泵释放一段时间后，在小鼠中成功诱导 PCOS。

摘要

多囊卵巢综合征 （PCOS） 是女性不孕的主要原因之一。动物模型广泛用于研究 PCOS 的病因机制和相关药物开发。来曲唑诱导的小鼠模型复制了 PCOS 患者的代谢和生殖表型。PCOS 小鼠来曲唑治疗的传统方法需要在一段时间内每天给药，这可能是劳动密集型的，并对小鼠造成显着压力。本研究描述了一种通过植入受控来曲唑释放微型泵在小鼠中诱导 PCOS 的简单有效的方法。制造了一个能够稳定、连续释放定量来曲唑的微型泵，并在麻醉下皮下植入小鼠体内。这项研究表明，小鼠模型成功模拟了来曲唑微型泵植入后的 PCOS 特征。本研究中使用的材料和设备对大多数实验室来说都是现成的，不需要特殊定制。总的来说，本文提供了一种独特的、易于执行的方法来诱导小鼠 PCOS。

引言

多囊卵巢综合征 （PCOS） 是育龄妇女¹ 中最常见的疾病之一。它影响了全球高达 18% 的女性，是全球女性不孕症的主要原因 ^2,3。PCOS 的特征是一系列相互关联的生殖异常，包括促性腺激素分泌紊乱、慢性无排卵、雄激素产生增加和多囊卵巢形态⁴。除了妇科疾病外，PCOS 还会增加患心血管疾病的风险 ^5,6。尽管进行了数十年的研究，但 PCOS 的病因仍不清楚 ^7,8。

为了更好地了解 PCOS 的发病机制并开发新的疗法，创建与人类生理学密切相关的动物模型非常重要⁹。目前报道的 PCOS 啮齿动物模型包括由睾酮、来曲唑和戊酸雌二醇等治疗诱导的啮齿动物模型。睾酮诱导高雄激素血症，更常用作大鼠的 PCOS 诱导剂¹⁰。DHEA 已被用于诱导啮齿动物的 PCOS，增加睾酮水平、LH....

研究方案

本研究中的所有动物实验方案均已获得复旦大学动物伦理委员会的批准。这里使用雌性 C57BL/6J 小鼠，年龄为 4 周。本研究中使用的动物、试剂和设备的详细信息列在 材料表中。

1. 微型泵的准备

1. 取储存在原包装瓶中的来曲唑粉末（50 mg），将瓶中的来曲唑粉末以 300 x g 离心 5 秒（在室温下），然后打开盖子。
2. 用移液管将 625 μL DMSO 缓慢加入来曲唑粉末中，并充分混合，得到浓度为 8 mg/100 μL 的储备溶液，总计 625 μL。
   注意：如果使用不同包装尺寸的来曲唑粉末，请提前计算所需的 DMSO 体积以配置储备溶液。来曲唑粉、DMSO 和其他相关化合物必须是无菌级的。移液器吸头、试管和其他相关物品在使用前应经过消毒或消毒处理。
3. 根据实验设计计算所需小鼠的数量。
4. 根据所需小鼠的数量，用移液管吸取所需的来曲唑原液总量，并将其缓慢注入离心管中。
   注意：选择暴露 8 周的 4 周龄小鼠以诱导 PCOS 小鼠模型。每只小鼠来曲唑的总剂量为 8 毫克，这需要植入两个连续的泵（一个泵释放 4 周），即每个泵 4 毫克/4 周。如步骤 1.2 中所述，来曲唑储备溶液的浓度为 8 mg/100 μL。为了准备泵，每个泵需要 ....

讨论

本报告展示了一种使用易于获取的材料在小鼠中诱导 PCOS 的简单方案。小鼠 PCOS 模型对于探索 PCOS 机制和筛选药物至关重要²⁶。在小鼠诱导 PCOS 模型的可用方法中，来曲唑诱导是最常用的方法之一。使用来曲唑可以通过抑制睾酮转化为雌二醇或通过增加睾酮合成来发展和维持高雄激素状况²⁷。来曲唑诱导的小鼠模型显示出与 PCOS

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Syringe	Bofeng Biotech	BD300841	1ML (sterile)
Centrifugation tube	Biological Hope	1850-K	15ML (sterile)
Pipette	Eppendorf	3123000268-A	100μL-1000μL (sterile)
Pipette	TopPette	7010101008	10μL-100μL (sterile)
Letrozole powder	Sigma	L6545-50MG	Primary acting drugs (sterile)
PEG(Poly(ethylene glycol))	Solarbio	P8250	Used for dissolution (sterile)
Sterile Physiological Saline Solution	Biosharp	BL158A	Mini-pump storage
Osmotic Pumps	ALZET	1004	Letrozole storage and sustained release (sterile)
Dimethyl sulfoxide	Biosharp	BS087	Used for dissolution (sterile)
Small Animal Anesthesia Machine	RWD	R500IP	Used for anesthesia
Isoflurane	RWD	20071302	Used for anesthesia
Hemostats	Biosharp	BS-HF-S-125	Surgical instrument
Scissors	Biosharp	BS-SOR-S-100P	Surgical instrument
Needle holder	ShangHaiJZ	J32010	Surgical instrument
Forceps	RWD	F12028	Surgical instrument
Needle and the 4-0 absorbable suture	JINGHUAN	CR413	Surgical instrument
Povidone-iodine swabs	SingleLady	GB26368-2010	Skin disinfection
Depilatory cream	ZIKER BIOTECHNOLOGY	ZK-L2701	Depilation agent for laboratory animals
Nitrile Gloves	Biosharp	BC040-L	Used for aseptic operation
Sterile gauze	ZHENDE	BA69087	Used for wiping liquids
C57BL/6J Mice	Shanghai Model Organisms Center	N/A	Age: 4 weeks
Pet Eye Lubricant	BAITE	SHF021153	Used for mouse eye lubricant
Meloxicam Injection	MEIDAJIA	R21064-21	Used for mouse analgesia (sterile)