一个串行收集脑脊液从池鼠标麦格纳技术

摘要

转基因（TG）AD小鼠模型提供了一个极好的机会，探讨如何以及为什么脑脊液中的Aβ或tau蛋白水平变化的疾病在人类患者进展。在这里，我们展示了一个串行鼠标脑脊液采样精枕大池穿刺技术。

摘要

阿尔茨海默氏病（AD）是一种渐进性神经退行性疾病，是由β-淀粉样肽（Aβ）和磷酸化tau蛋白的intraneuronal积累外沉积病理特征。由于脑脊液（CSF）是在与外脑的空间直接接触，它提供了一种在大脑中的反应病理过程中的生化变化的反映。 AD患者脑脊液减少Aβ（Aβ42）的42个氨基酸的形式，并在总tau蛋白和磷酸化tau蛋白的增加，但负责这些变化的机制还没有完全理解。转基因（TG）AD小鼠模型提供了一个极好的机会，探讨如何以及为什么脑脊液中的Aβ或tau蛋白水平变化，随着病情的发展。在这里，我们展示了一个精致脑脊液从鼠标的采样枕大池穿刺技术。这种极其温柔的采样技术可在2-3个月的时间间隔相同的鼠标，从而大大降低鼠之间的Aβ或tau蛋白水平的变化混杂的效果，使得它可以检测到细微的改变，随着时间的推移得到串行脑脊液标本。在与Aβ和tau蛋白的ELISA法的结合，这种技术将被用于旨在探讨在AD小鼠模型中的大脑的脑脊液Aβ42和tau蛋白的水平之间的关系，和他们的新陈代谢的研究。脑脊液的Aβ或头水平的潜力可作为监测疾病的进展生物标志物的Tg小鼠的研究可以提供重要的验证，并监测治疗干预的效果。作为可以牺牲的老鼠的大脑可用于生化或组织学变化研究，脑脊液变化的内在机制，可以更好地进行评估。这些数据可能被解释为人类AD脑脊液变化信息。

研究方案

拉玻璃毛细管

1. 从萨特仪器公司（硼硅玻璃，B100 - 75 - 10）的玻璃毛细管购买。
2. 拉毛细管，在萨特的P - 87火焰山微量拉拔器，设置热指数在300和330压力指数。
3. 用剪刀修剪的玻璃毛细管中的一角，使锥尖有一个约0.5毫米的内径。

枕大池脑脊液穿刺技术

脑脊液标本均取自枕大池使用，此前公布的¹的方法（图1） 。



图1

1。 anesthesized氯胺酮（100mg/kg）和甲苯噻嗪（10mg/kg的），腹腔注射的老鼠。在麻醉诱导时，老鼠都保持在^37℃培养箱。

2。颈部的皮肤被剃光，鼠标，然后放置俯卧于脑立体定位仪与直接接触加热垫。直肠温度探头插入直肠，使产生的热量加热垫在体温的变化进行调整。头是头适配器担保。手术部位是用10％ 碘伏擦洗，其次是 7 0％乙醇（重复3次），矢状切口的皮肤是劣质枕部。

3。解剖显微镜下，皮下组织和肌肉（M. biventer cervicis和M.直肌头癣实蝇主要 ）是分开的钝性分离钳。一个对microretractors除了用来存放肌肉。

4。放下鼠标，使头部形成一个近^{135 o}与身体的角度。

5。解剖显微镜下，枕大池硬脑膜出现延髓和主要血管（动脉实蝇spinalis），脑脊液空间是可见的（图2）作为一个闪闪发光的和明确的反向三角形。



图2

6。硬脑膜抹杀用无菌棉签擦干。毛细管渗透到citerna麦格纳通过硬脑膜，外侧足背动脉spinalis（图2）。电阻插入毛细管的一个显着的变化，脑脊液流入毛细管。

7。小心取出毛细管，并通过内部直径1毫米的聚乙烯管材连接3毫升注射器。脑脊液注入到一个预先标记的0.5 mL Eppendorf管，并立即冻结管干冰，然后转移到一个-80 ° C冰箱。

8。脑脊液取样后，肌肉重新对齐，和皮肤缝合（4-0，爱惜康，强生公司）。约1毫升0.9％氯化钠溶液皮下注射，防止脱水。鼠标是保存在孵化器，以保持体温，直到它恢复，监视鼠标的重量是1天，并在手术后1周。

结果与讨论

我们描述了一个高度可靠的协议，从小鼠脑脊液串行采样，没有检测到的血浆污染。

1。整个过程通常需要10分钟（包括麻醉）每鼠。获得脑脊液量是依赖于小鼠品系。的PS / APP双，我们用了² Tg的小鼠，平均体积约5μL（3至7μL），而P301L（JNPL3）小鼠³产量约10μL，15μL。串行采样，最多7-8μL，可以安全地在每次间隔2-3个月。

2。在手术过程中，它的重要位置上的立体框架鼠标的头部和身体正常，可以充分暴露硬脑膜，使枕大池。小心避免血管穿透硬脑膜毛细管血浆蛋白，可在脑脊液样本中载脂蛋白^B（ApoB）4免疫监测，以防止污染。

3。最大限度地减少组织损伤手术在每个重要的是，组织粘连，可以增加诱发出血以下取样的难度。

4。需要手术过程中保持体温，因为麻醉造成的低温可显着地影响大脑中的磷酸化tau水平^非常迅速5。

5。抗体酶联免疫吸附协议和抗体，我们用中详细介绍了Refolo等^。6。脑脊液μL的PS / APP小鼠会产生令人满意的结果，在稀释1:50-1:60。对于头ELISA法，4-5微升脑脊液P301L（JNPL3）小鼠，将足以为检测总头或头 荧光粉在苏氨酸ylated 231（包从生物源购买）。

6。这种技术可以应用到其他神经系统疾病，脑脊液体积小，其中一个是所需检测的满意的小鼠模型。

讨论

我们描述了一个高度可靠的协议，从小鼠脑脊液串行采样，没有检测到的血浆污染。

1。整个过程通常需要10分钟（包括麻醉）每鼠。获得脑脊液量是依赖于小鼠品系。的PS / APP双我们used2的Tg小鼠，平均体积约5μL（3至7μL），而P301L（JNPL3）小鼠3产量约10μL，15μL。串行采样，最多7-8μL，可以安全地在每次间隔2-3个月。

2。在手术过程中，它是很重要的位置上的立体框架鼠标的头部和身体正常，可以充分...