革兰氏染色的细菌环境来源

1.样品采集

1. 微生物分析实验室收集土壤样品和运输。
2. 在实验室中，权衡使用分析天平 10 g 的样品。
3. 到 95 毫升的磷酸盐缓冲液稀释样品 1:10 （10 的部分土壤是相当于 5 个部分含水液体），和涡混合 (图 2，步骤 1)。
4. 执行后续 1:10 稀释到至少 10^-5克每毫升，土壤和扩散板中的两个或三个到低营养琼脂培养基 （例如R2A） 复制选定稀释 (图 2，步骤 2-3）。
5. 板孵育一周在室温 （图 2，步骤 4）。
6. 选择一个或两个殖民地为隔离和条纹上新鲜琼脂板 （图 3，步骤 1-3）。
7. 条纹板孵育两到三天，在室温 （图 3，步骤 4）。

2.细菌涂片的制备

1. 观察条纹板为孤立的殖民地。
2. 准备每个涂片预科，蘸接种的循环转化为乙醇，火焰消毒，并将 1 至 2 loopfuls 的无菌蒸馏水放置到中心的预清洗的玻璃载玻片上。
3. 消毒再如前面所述的接种环。一旦冷却，从单个孤立菌落取出少量的文化并混入水滴在幻灯片上 （涂片应类似于稀释的脱脂牛奶）。接种环必须冷却之前菌落分离。太热循环将导致殖民地和/或介质飞溅，这可能会导致细菌的雾化。一般来说，使用太热循环时，应用于琼脂或殖民地时，将听到"嘶嘶"的声音。不当冷却循环可能也导致效率较低的文化到幻灯片转让和畸变的细胞形态。
4. 遍布的幻灯片测量大约 2.5 厘米 × 2.5 厘米，表面涂片并允许它空气干燥。它是重要的空气干燥，在层流条件下出现的。幻灯片不应该吹干，以免破坏涂片。此外，幻灯片不必须火焰干燥，以维持细胞形态。
5. 干燥后，热修复涂片通过幻灯片迅速通过火焰 2-3 倍。幻灯片不应被固定在火焰中，以防止玻璃幻灯片畸变细胞形态和/或损害。

3.革兰氏染色

1. 安全在一端使用干净晾衣夹幻灯片。
2. 覆盖涂片有结晶紫 （初级污点） 按住 2 到 3 分钟。
3. 细细的洗用蒸馏水幻灯片。小河的水应不针对涂片以防止损坏和/或脱离玻璃幻灯片。
4. 盖克的碘与涂片为 2 分钟，按住，然后轻轻地洗净用水幻灯片。
5. 脱色涂片，用 95%乙醇，直到污渍不再洗从幻灯片 (这通常以不超过 20 s 根据涂片的厚度)，然后立即用蒸馏水冲洗。这一步关键是要避免过度脱色的幻灯片，可能会导致虚假的污点指定克 （即克变量）。
6. 将复染剂 （蕃） 添加到涂片来按住 30 s。然后轻轻地冲洗幻灯片用蒸馏水和抹乾用吸水纸。

4.镜观察幻灯片

1. 观察使用低 （例如，4 X 或 10 X），（例如，40 X），高干的幻灯片和油浸 (100 X) 目标。为油浸泡、 添加油直接涂片。
2. 革兰氏阳性菌和革兰阴性杆菌的土壤细菌的代表结果，请参阅图4和图5。

图 2。稀释和传播电镀技术。请点击这里查看此图的大版本。

图 3。用条纹板技术的菌落分离。

图 4。革兰氏阳性菌土壤细菌金黄色葡萄球菌.

图 5。革兰阴性杆菌的土壤细菌大肠埃希氏大肠杆菌.