（紫外-可见） 的紫外-可见光谱法
Overview
资料来源: 实验室的博士 B.吉尔 Venton-弗吉尼亚大学
（紫外-可见） 的紫外-可见光谱法是最受欢迎的分析技术之一，因为它是非常多才多艺，能够检测到几乎每一个分子。紫外-可见光谱法，紫外-可见光光通过样品和样品的光透射率衡量。从透光率 (T)，可以作为 =-日志 (T) 计算吸光度。吸光度谱表明在不同波长的吸收的化合物。所用的任何波长处的吸光度是由于分子的化学结构。
紫外-可见可用于以定性的方式，确定官能团或通过匹配吸收谱确认身份的一种化合物。作为分析物的浓度与吸光度使用啤酒的法律，也可以以定量的方式，使用它。紫外-可见光谱法用于量化的 DNA 或蛋白质在示例中，水分析，以及对许多类型的色谱的检测器。化学反应动力学也通过随着时间的推移在重复的紫外-可见测量，测量与紫外-可见光谱。一般用分光光度计进行紫外-可见度量。紫外-可见也是非常受欢迎仪其他分析技术，如色谱法，因为它可以检测许多化合物。
通常，紫外-可见不是光的最敏感的光谱技术，因为不是光的很多被吸收在较短的路径长度。其他如荧光的光谱技术有较高的灵敏度，但他们不是作为一般适用，因为大多数分子不是荧光。紫外-可见到其他吸光度测量，如红外光谱相似的灵敏度。
Procedure
1.校准分光计
- 紫外可见光谱仪打开，允许灯，以适当的一段时间 （大约 20 分钟） 以稳定他们热身。
- 试管装满样品的溶剂和确保外面是干净。这将作为一片空白，并有助于占光损失散射或吸收的溶剂。
- 将试管放在分光计。请务必正确对齐的试管，试管一样经常有两面，这意味着处理 （可能槽） 而不是通过的光芒。
- 以阅读为空白。吸光度应该很小，但任何吸光度应减去未来样品。一些文书可能将空白数据存储和自动执行减法运算。
2.执行吸收光谱
- 试管装满样品。若要确保转让是定量，冲洗两次与样本试管，然后填充它关于 ¾ 充分。请确保外面是清洁的任何指纹，等等。
- 将试管放在光谱仪在正确的方向。
- 盖试管以防止任何光线。
- 通过允许通过不同波长扫描和收集吸光度的手段来收集吸收谱。波长范围可以设置与信息有关该特定的示例，但一系列 200-800 nm 是标准。二极管阵列仪器是能够收集在一个运行整个吸收谱。
- 从收集的吸收光谱
Results
Application and Summary
紫外-可见用于许多化学分析。它用来定量的大量蛋白质在溶液中，大多数蛋白质强烈吸收在 280 nm。图 3显示一个示例谱细胞色素 C，具有高吸光度亚铁血红素基团在 450，280。紫外-可见也用作为一种标准技术量化的 DNA 样本，因为所有的垒强烈吸收在 260 nm。RNA 和蛋白质也吸收在 260 nm，所以可以测量其他波长处的吸光度，检查是否有干扰。具体而言，蛋白质强烈吸收在 280 nm，所以 280/2...
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