为了在一个锅中自组装DNA折纸结构,首先在补充有15毫摩尔氯化镁的TAE缓冲液中制备2.5纳摩尔的圆形支架链M13mp18和100纳摩尔的201短寡核苷酸短链的混合物。然后使用超纯水将溶液的总体积调节至100微升。使用温度梯度在热循环仪中退火。
首先快速加热到80摄氏度,然后按照显示的温度梯度程序逐步操作。为了从多余的主食中纯化混合物,将100微升DNA折纸溶液添加到100千道尔顿截止的amicon过滤器中。然后加入400微升超纯水。
然后在室温下以6, 000G离心8分钟。离心后,取下过滤器并翻转管以丢弃滤液。如前所述,向过滤器和离心机中加入400微升超纯水。
收集纯化的纳米结构溶液。在新管中将过滤器倒置,按照制造商的说明在室温下以 1, 000G 离心两分钟。使用原子力显微镜或AFM成像确保DNA折纸叉的正确组装。
正如预期的那样,大多数叉子都是实心的,没有断臂。然而,手臂之间的桥由于其直径小且灵活性高而难以成像。