首先在带有两毫升洗涤缓冲液的六孔板中洗涤小鼠脂肪来源的干细胞。孵育并洗涤细胞三次后加入一毫升封闭试剂。缓慢搅拌孵育细胞20分钟。
向每个孔中加入200微升一抗,并在4摄氏度下孵育过夜。如前所述洗涤板三次后,与200微升二抗一起孵育。洗涤板三次后,用 100 微升 DRAQ7 对细胞核复染 20 分钟。
重复洗涤并安装载玻片。在落射荧光共聚焦显微镜下可视化已安装的载玻片。在所有测试的亚传代中,脂肪来源的干细胞对CD9表面标志物呈100%阳性。
所有细胞在第一代、第三代和第九代中表达CD63标志物,而49.3%的细胞在第7代表达CD63标志物。CD34标记物在第1、7和9代中不存在,但在第三代可见。