Collection and Analysis of Hemolymph from Small Brown Planthopper (SBPH)

对于这项研究，使用在水稻幼苗中饲养的小棕色飞虱或SBPH。培养物准备好后，将生长的SBPH放入离心管中，并将它们置于冰浴中10至30分钟。然后将冷冻的SBPH放在体视显微镜下的载玻片上，腹部朝上，并调整其六条腿的焦点。

准备两个带有超细尖端的高精度镊子。使用一个镊子，按下昆虫的身体以将其保持在适当的位置，然后用另一把镊子小心地拉下一条腿。然后轻轻按压昆虫的胸部，让血淋巴流过伤口。

为了收集血淋巴，通过将一微升毛细管放入移液管球中来准备微量移液器。将毛细管靠近昆虫伤口，握住微量移液器移液器灯泡。将毛细管尖端触摸渗出的血淋巴并收集它。

一旦毛细管到达所需的刻度线，用手指稍微堵住移液器灯泡上的小孔以停止吸收过程。然后将收集的血淋巴排出到100微升PBS缓冲液中。通过SDS-PAGE证实了血淋巴收集的准确性，该样本在单独收集的所有三个血淋巴样本中显示相似的蛋白质含量。

对于幼虫，总蛋白质浓度约为每毫升3.7毫克。成年雌性和雄性SBPH的蛋白质浓度分别为每毫升约3.5毫克及3.6毫克，三个样本间无显著差异。幼虫血淋巴显示2至20纳米大小的血细胞。

此外，在收集的三个血淋巴样本中，细胞浓度相当。