首先，准备两毫升4%福尔马林或任何其他适当的固定剂。在开始手术之前，还要准备好培养皿、镊子和手术剪刀。将适当安乐死的冷冻受伤鱼放入含有去离子水的培养皿中。
使用剪刀在身体，尾柄的前部和后部进行切口。让组织在培养皿内的去离子水中流出。使用镊子，收集尾柄并将其转移到微量离心管中制备的固定溶液中。
小心地将管子倒置几次。安装前，在摇臂上清洗PBS中的固定组织10分钟。然后将其转移到含有30%蔗糖在去离子水中溶液的两毫升微量离心管中，预冷至4摄氏度并轻轻倒置试管数次。
将管子直立在 4 摄氏度下至少 24 小时。用五毫米的OCT封片剂填充嵌入模具。使用镊子，将尾柄放在模具底部。
调整其横向或冠状截面的方向。让培养基在一盒干冰中冷冻。一旦组织稳定在所需位置，在OCT完全冻结之前填充模具的其余部分。
在使用低温恒温器切片组织之前，将模具存放在 80 摄氏度下至少一小时。使用由苯胺蓝、酸性梭菌和橙-G组成的三色染色法分析了冷冻损伤后不同日子（DPCI）在尾柄切片中的冷冻损伤程度。受损区域由没有橙色染色确定。
在 4 和 7 dpci 处，横截面在身体的冷冻损伤侧腹显示广泛退化的骨骼肌。免疫荧光分析显示，在4 DPCI时，尾柄损伤侧含有丰富的DAPI阳性细胞，但几乎没有F-肌动蛋白和原肌球蛋白1，表明肌肉退化。在7dpci时，可以在伤口中检测到原肌球蛋白1和F-肌动蛋白，靠近垂直体中线，表明新的肌纤维形成的开始。
在30 dpci时，身体两侧显示出相似的F-肌动蛋白染色分布，表明有效的骨骼肌恢复。
