Preparation and Injection of Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Emulsion

首先使用研钵和研杵将10毫克冻干的副结核分枝杆菌研磨成细粉。加入 5 毫升不完全弗氏佐剂，以获得每毫升 10 毫克的储备溶液。将库存储存在零下四摄氏度。

免疫前，稀释储备溶液。然后，将MOG 35-55肽稀释至每毫升2毫克，并将其储存在零下20摄氏度。将等体积的MOG 35-55与佐剂混合在带有均质器的5毫升管中，直到形成浓稠的乳液。

每混合10秒后，将溶液放在冰上20秒，然后旋转管以回收所有溶液。将乳液转移到一毫升注射器中，确保其没有气泡。然后，用 27 号针安装它。

皮下注射200微升乳液到麻醉小鼠的下背部。然后，在免疫接种后的第0天和第2天腹膜内注射一剂百日咳毒素。所有小鼠均表现出急性单相疾病，其特征在于在第14至17天观察到单一的残疾高峰，随后在接下来的10天内症状部分恢复。

接种副结核分枝杆菌的小鼠在免疫后发病较早，急性期更严重。两组表现出相似的体重。在EAE小鼠脾细胞上进行滴定胸苷掺入的增殖测定对肽MOG 35-55显示出强烈的增殖反应，但对卵清蛋白没有。

细胞荧光分析显示，与CFA免疫小鼠相比，副结核分枝杆菌免疫EAE小鼠脾脏中的T淋巴细胞，树突状细胞和单核细胞增加。苏木精和伊红组织分析显示脑和脊髓中典型的血管旁和脑膜单核炎浸润。