首先将200微升还原血清培养基与2微克任何一种质粒DNA分别在无菌微量离心管中混合。对单独试管中的另外两个质粒重复此操作。然后在新的试管二中，将200微升还原血清培养基与6微升转染试剂混合，并通过移液混合内容物。
将试管在室温下孵育五分钟，然后将试管二的内容物混合到试管一中。在单独的试管中，重复将其他两个质粒与转染试剂混合。将混合物在室温下孵育20分钟。
接下来，逐滴将转染复合物添加到HeLa细胞培养接种的成像培养皿中，确保在整个培养皿中均匀分布。成像前一小时，打开二氧化碳罐阀并打开显微镜的环境控制器。使用触摸板上的向上和向下箭头，将温度调整为 37 摄氏度，将二氧化碳调节至 5%完成后按设置。
要调整激光设置，请通过单击采集选项卡并选择打开激光概述来打开白光激光。在对话框中，将白光激光切换到打开。输入激光功率为 85%单击激发控制按钮，然后从下拉菜单中选择最大功率。
开始四乙基罗丹明乙酯渗透或TMRE，通过将YFP的激发激光设置为514纳米，将发射光谱窗口设置为524至545纳米进行实验。接下来，对于MitoTracker Deep Red，将激发激光设置为641，将发射光谱窗口设置为650至750纳米。同样，对于 TMRE，将激发激光设置为 555 纳米，将发射光谱窗口设置为 557 至 643 纳米。
通过选择采集选项卡并将格式调整为 1024 x 1024 开始图像采集设置。在下拉菜单中将速度调整为 600。然后单击线平均值按钮，然后从下拉菜单中选择三个。
打开双向扫描并将相位和变焦系数分别设置为 22.61 和 1.50。完成后，通过单击YFP设置并按快速活，根据YFP荧光信号选择细胞。然后调整YFP的增益和强度，然后根据YFP荧光信号选择细胞。
要在TMRE实验中对DMSO控制板进行成像，请调整TMRE信号设置的增益和强度2，以使线粒体网络强度略低于饱和度。保持TMRE的增益和强度恒定。然后调整MitoTracker设置的增益和强度，使线粒体网络可见，但暗淡。
增益和强度设置完成后，单击“开始”以获取图像。在每个实验条件下获取20个细胞的图像。
