Superparamagnetic Antibody-Based Mitochondrial Purification

首先将 RAW 264.7 线粒体的一毫升粗馏分转移到 15 毫升锥形管中。加入7毫升盐渍线粒体缓冲液，补充有150毫摩尔氯化钠。向悬浮液中加入 50 微升 TOM22 珠，然后将试管在旋转轮上低速孵育。

将一根色谱柱放在磁铁上，并用八毫升盐渍线粒体缓冲液平衡色谱柱。丢弃流出物。样品孵育后，将其转移到色谱柱中并丢弃流通物。

接下来，用八毫升盐渍线粒体缓冲液洗涤色谱柱三次。从磁铁上取下色谱柱并将其放入 15 毫升锥形管中。要洗脱线粒体，加入1.5毫升盐渍线粒体缓冲液，并立即使用柱塞将纯化的级分洗脱到管中。

将洗脱的馏分转移到新的1.5毫升管中，并在4摄氏度下以21， 000G离心10分钟。丢弃形成的上清液并将棕色纯线粒体沉淀储存在20摄氏度以备将来研究。纯化线粒体提取物的免疫印迹分析显示线粒体柠檬酸合酶富集，其他细胞器蛋白质消耗殆尽。

使用电子显微镜进行的线粒体完整性研究显示线粒体具有经典的椭圆形和完整的嵴，周围环绕着电子致密抗体包被的珠子。此外，蛋白质组分析显示线粒体蛋白和对应于线粒体和非线粒体蛋白的两个不同群体的富集。