Isolation and Normalization of DNA Containing Crosslinked Proteins

要开始分离和标准化含有DNA的交联蛋白，请在泛素化和SUMO化药物治疗后使用吸液管吸出培养基。在加入600微升DNAzol试剂之前，用冰冷的PBS冲洗细胞。在4摄氏度的振动平台上缓慢搅拌板10分钟，然后直接向板中加入0.3毫升100%冷乙醇。

重复搅拌，直到可见不透明的核酸聚集体。接下来，将细胞裂解物转移到1.5毫升微量离心管中，并在4摄氏度下以20， 000G离心15分钟.吸出上清液后，在一毫升75%乙醇中洗涤核酸和交联蛋白沉淀，然后在20， 000G和4摄氏度下离心2分钟。吸出上清液，然后以相同的速度旋转并使用P-20移液器除去剩余的液体。

将颗粒风干五分钟。通过上下移液几次，将干燥的核酸沉淀溶解在0.1毫升的双蒸水中。然后，将悬浮液在37摄氏度的水浴中孵育30分钟，直到沉淀至少膨胀三次。

使用超声处理器探针以30%振幅对样品进行超声处理10秒钟，并使用紫外-可见光谱仪定量DNA浓度。加入双蒸水，将DNA的浓度调节到120微升中每微升400至500纳克。然后，将20微升样品转移到新的微量离心管中作为未消化的DNA上样对照。

向DNA中加入2， 000凝胶单位的微球菌核酸酶和11微升10X钙微球菌核酸酶反应缓冲液，溶解在剩余的100微升双蒸水中。在 37 摄氏度下孵育 30 分钟。