开始在 12 毫升 DMEM 中接种 200 万个 pan02 细胞，并在 37 摄氏度和 95% 湿度、5% 二氧化碳和 35% 空气中孵育。48小时后，将培养物以28g离心2分钟，弃去上清液。通过在 1.5 毫升微量离心管中加入 1 毫升 2.5% 戊二醛在 4 摄氏度下过夜来固定细胞。
第二天将样品以1006g离心5分钟并吸出固定剂，然后用0.1摩尔PBS冲洗样品两次。随后，用双蒸水冲洗样品两次，每次10分钟。接下来，以1：1的比例加入1%四氧化锇和1.5%亚铁氰化钾的50微升溶液，并在4摄氏度下孵育1小时。
用0.1摩尔PBS离心并冲洗样品两次，用双蒸水冲洗一次。然后加入1毫升1%硫代碳酰肼，在室温下孵育30至60分钟。孵育后离心并弃去上清液，然后用双蒸水冲洗样品4次。
接下来，加入 50 微升 1% 四氧化锇，并在室温下固定 1 小时。再次离心并用双蒸水冲洗样品4次。加入 1 毫升 2% 乙酸铀酰，使其在 4 摄氏度下染色过夜。
用双蒸水冲洗样品后，加入1毫升沃尔顿溶液，并在60摄氏度下孵育一小时。孵育后，用双蒸水冲洗细胞4次，然后在分级乙醇系列中脱水10分钟。然后在一毫升 100% 丙酮中脱水两次，每次 10 分钟。
接下来，将 200 微升丙酮与 Pon 812 环氧树脂以 3 比 1、1 比 1 和 1 比 3 的比例混合。并将样品分别在室温下浸泡在树脂中2,4和4小时，分别孵育后将样品在100%Pon 812环氧树脂中浸渍过夜。第二天，将标本转移到平整的包埋模具中，并在60摄氏度的烤箱中聚合48小时。
聚合后，使用超薄切片机，在水解硅片上收集70纳米厚的连续切片条，并在60摄氏度的烤箱中干燥10分钟。
