切割导电碳带并将其粘在装有胰腺细胞切片和SEM样品台的硅晶片之间。接下来，将FESEM加速电压设置为2kV，工作距离为4毫米。在顶部菜单栏中，单击 HL 图标。
然后，在低放大倍率下，定向目标切片条的第一部分，然后再次单击 HL 图标切换到高放大倍率模式。通过调整图像亮度、对比度和放大倍率，为感兴趣的结构收集适当的图像。接下来，选择“项目视图”，然后选择“打开数据”，并将要分析的图像文件导入软件。
通过单击对齐图片 对齐切片和编辑.然后，在左下角的菜单栏中，通过修改图像透明度来调整强度范围值。选择“提取子体积”模块，然后单击对齐的数据集以适合整个堆栈的重叠部分的大小。
接下来，在分割子部分下，选择重新采样，然后选择分割，然后单击保存。然后，选择魔棒的阈值和画笔工具的大小，以选择正确的范围。从“选择”菜单中，单击“添加”图标以添加所选区域。
完成区域分割后，按照对象大小和图片分辨率的最佳结果生成图像文件。单击裁剪编辑器，然后在“虚拟滑块”框中，输入数字六。接下来，从左侧下拉菜单中，右键单击“项目”子部分下的灰色区域，然后选择“生成曲面”，然后选择“创建并应用”。
在生成的文件中，使用曲面视图模块创建曲面结构和 3D 表示。2D FESEM图像显示，在对照组中，线粒体均匀分布，具有规则的嵴结构。相比之下，RSL3组显示线粒体收缩，膜密度增加，嵴结构模糊。
然而，并非所有线粒体嵴在RSL3组中退化，因为有些仍然完整。与RSL3组相比，抑制剂组大部分具有完整的嵴结构，只有少数不明显。对照组的3D图像提供了线粒体及其嵴结构的更准确视图。
RSL3组3D图像显示不规则和空泡状线粒体，而抑制剂组显示不同的嵴形状。线粒体改变的定量显示，与对照组相比，RSL3组的线粒体长度和体积显着减少，而抑制剂组显示出中间结果。RSL3还通过改变线粒体形态和触发铁死亡引起线粒体功能障碍并改变细胞代谢。
