ChP Specific Knockdown of A2ARs with AAV2/5-shRNA and Cre/LoxP System

首先，将麻醉的小鼠放在手术平台上。修剪头发后，在双眼上涂抹眼药膏，以防止它们干燥。然后将小鼠固定在立体定位装置上进行固定。

在显微镜下做一个小切口，使颅骨完全暴露。准备两个 10 微升注射器，一个含有 AAV2/5-腺苷 2A 受体 shRNA，另一个含有 AAV2/5 加扰剂。然后使用显微镜定位前囟和λ，并基于小鼠大脑立体定位图谱在10微升注射器上设置坐标点。

在已建立的坐标点处在头骨上钻一个小孔。通过侧向注射以每分钟100纳升的稳定速率将两微升AAV2 / 5-腺苷2A受体shRNA病毒注射到脑室中。在拔出之前，将针头保持在原位 10 分钟。

使用医用生物纤维蛋白胶及时密封受伤的皮肤，以防止病毒流失。将鼠标放在加热垫上，将其体温保持在 37 摄氏度左右，以利于恢复。实验组将两微升CRE-TAT重组酶注射到Arosa L-D-L-T-D番茄小鼠的每个侧脑室中，对照组注射两微升无菌PBS。

注射CRE-TAT重组酶两周后，准备冷冻组织切片，进行核染色并准备玻片进行成像 使用CRE-TAT敲低纯合腺苷2A受体通量小鼠脉络丛中的腺苷2A受体，导致EAE临床评分降低。同样，使用 AAV2/5 shRNA 敲除腺苷 2A 受体野生型小鼠的脉络丛可降低 EAE 临床评分。QPCR分析显示，与各对照组相比，AAV2/5 shRNA组和CRE-TAT组腺苷2A受体mRNA水平降低。

沉默腺苷2A受体，特别是在脉络丛中，减少免疫细胞浸润到脊髓中。