Visualizing Recombinant Protein-Filled Vesicles from E. coli by Fluorescence Microscopy

为了染色囊泡膜，将荧光脂质染料FM4-64以两微摩尔的终浓度加入纯化的囊泡中，并在成像前孵育10分钟。从大肠杆菌培养物中分离出充满蛋白质的囊泡后，将纯化的囊泡移液到小于一毫米薄的圆形2%LB琼脂糖垫上，该垫已被允许形成并设置在干净的载玻片上。液体干燥后，将 50 毫米乘 25 毫米的盖玻片放在垫子上的囊泡上。

用垫片和胶带将盖玻片固定到位。然后使用油浸物镜将载玻片安装到倒置显微镜上，并将样品放置两到三分钟以稳定并平衡温度。对于单帧图像，请使用三个图像平均来减少与硬件相关的随机背景噪声。

对于延时成像，在各个帧之间留出三到五分钟。宽场荧光显微镜成像显示纯化的羊膜绿色含有囊泡。亲脂性荧光染料FM4-64证实了囊泡膜的存在。

表达内膜蛋白CydB的活细菌细胞的结构照明显微镜，融合到羊膜绿和VNp6-mCherry2显示囊泡产生和货物插入。