Yeast Cell Culture and Cell Harvesting for Single-Copy Gene Locus Chromatin Purification

首先将 YPD 平板中的对照和重组感受态酵母菌株接种到 5 毫升 YPR 培养基中，并在 30 摄氏度和 200 RPM 下培养培养过夜。接下来，通过将两毫升接种到 100 毫升新鲜 YPR 培养基中并在 30 摄氏度和 200 RPM 下生长过夜来扩大培养规模。对于每种菌株，将 1， 800 毫升高压灭菌酵母蛋白胨培养基和 200 毫升高压灭菌器 20% 棉子糖溶液分配到两个 5 升锥形瓶中。

在相应的培养基中以 600 纳米的 0.2 光密度接种每个酵母菌株，并在 200 RPM 下孵育约 6 小时，或直到细胞达到所需的 1.0 光密度。同时加入 200 毫升 2% 半乳糖和 110 微升酵母交配因子 α 或 YMFA，以在 G1 期停滞细胞并孵育两小时。将细胞悬液转移到一升离心桶中，并以 6， 000 G 和 4 摄氏度离心桶 10 分钟。

弃去上清液，将细胞沉淀重悬于10至15毫升蒸馏水中。接下来，用诱饵塞密封一个 25 毫升的注射器，并将其放入装满水的 50 毫升锥形管中。将细胞悬液转移到注射器组件上。

用五毫升蒸馏水清洗离心桶以收集剩余的细胞。然后，在室温下以2,397G离心组装体10分钟，弃去上清液。然后从注射器上取下诱饵塞，将细胞挤出到液氮中，形成细胞意大利面。

最后，将冷冻的细胞意大利面转移到 50 毫升锥形管中，并将其储存在零下 80 摄氏度，直到进一步使用。