Mounting and Live-Cell Imaging of Drosophila melanogaster Third Instar Larval Brain

为了对第三龄幼虫脑进行活细胞成像，首先将解剖的大脑和分离的脂肪体收集在包含解剖和成像介质的三孔解剖皿的最后一孔中。将透气膜放在载玻片的背面，然后将分体环压入中心。使用200微升微量移液器，将多达10个解剖的大脑与最大可能的脂肪体和130至140微升的培养基转移到膜的中心。

根据要成像的神经干细胞群和显微镜类型来定位大脑，确保样品接近显微镜的物镜。例如，要对中枢脑叶中的神经干细胞进行成像，请确保脑叶最接近物镜。然后轻轻地将玻璃盖玻片放在膜上的溶液上，将溶液与大脑和脂肪体一起散布在整个膜上。

将实验室组织保持在盖玻片边缘以吸干多余的溶液，直到大脑接触盖玻片而不会被压扁。接下来，使用画笔沿其边缘涂抹熔融凡士林来固定盖玻片，让果冻凝固。将400微升成像介质加入多孔微量载玻片中的孔中。

将先前解剖的脂肪体转移到这口井中。然后，将多达 10 个大脑放在井中心附近的一簇中。根据要成像的神经干细胞群和显微镜类型来定位大脑。

让大脑在井中沉淀两到五分钟。在将其转移到显微镜之前，用载玻片盖住微型载玻片。使用最低的激光功率和曝光时间开始采集过程，以尽量减少光漂白。

使用多孔成像载玻片对表达UAS驱动的樱桃木星和雌雄同体标记的针GFP的幼虫大脑成像，并且没有脂肪体补充，显示针在分裂神经母细胞中形成明显的顶端新月，有丝分裂纺锤体在有丝分裂期间始终对齐。在这些样品中，细胞周期长度随着成像时间的增加而增加。在膜结合载玻片上补充脂肪体的培养基中成像的样品未显示细胞周期长度增加。

此外，在10小时膜结合载玻片上观察到具有四个分裂的神经母细胞。