首先，取一个先前就座的24孔培养板，并在每个孔中放置一个玻璃盖玻片。然后加入含有10%FBS和DMEM的800微升培养基。调整细胞浓度后。
在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育 24 小时。然后丢弃培养基并用PBS洗涤细胞。将细胞悬浮在含有BSA的800微升DMEM诱导培养基中。
将亚油酸溶解在无水乙醇中，制备浓度为每升100毫摩尔的标准溶液。在板中以递增的梯度加入亚油酸，重复四次。然后将板在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育 24 小时。
在孵育结束时，除去培养基并用PBS洗涤细胞三次。用 400 微升 4% 多聚氰醛固定 20 分钟。然后丢弃固定液并再次洗涤。
用60%异丙醇孵育细胞五分钟，然后丢弃。加入新鲜制备的油红O工作溶液，20至30分钟后丢弃。用PBS洗涤细胞两到五次，直到去除多余的染料溶液。
用300微升苏木精溶液重新染色细胞核一到两分钟。然后丢弃染料溶液并再次洗涤。从PBS洗涤板上取下玻璃盖玻片，并将其细胞面朝下放置在含有10微升片剂密封剂的显微镜载玻片上。
要测量LD的大小和数量，请依次打开计算机和显微镜开关，并将载玻片放在装载平台上。然后打开图像分析软件。找到低功率的图像，并在成像载玻片上滴上适量的雪松油。
逐渐调整物镜200倍并调整视野，直到找到清晰的图像。然后从所需区域捕获图像并保存。随机为每个图像选择 60 个 LD 并测量直径。
将测量结果导出到表中，以分析LD的平均大小和分配比例。染色的肝细胞培养细胞显示出不同大小和数量的LD。在不同浓度下进行亚油酸处理。
每个细胞的LDs数量与不同浓度的亚油酸呈负相关。每升100微摩尔亚油酸处理组每个细胞的中位LD数为136，并且在高浓度下降低。对照组LDs的平均直径为0.72 μm，随浓度的增加而增大。
高亚油酸浓度增加了大LDs的比例，降低了小LDs的比例。
