首先，准备稀释至患者的血清或脑脊髓液样本进行检测。用 0.05%Evans Blue 在 PBS 中稀释，以适当的工作浓度制备所需的偶联物。对于间接荧光抗体检测，取回测定所需的适当数量的制备抗原载玻片。
让载玻片完全解冻和干燥。接下来，将载玻片放入充满丙酮的 Coplin 罐中，并将它们转移到经批准用于易燃材料的零下 20 摄氏度冰箱中两小时至过夜。然后，从丙酮中取出载玻片并让它们风干。
现在，将载玻片放入生物安全柜内的湿度室箱中。为了保持湿度，将蒸馏水浸泡的吸收条添加到腔室中。将50微升的每个对照样品，样品稀释液或PBS施加到预定孔中。
将封闭的湿度载玻片室置于 37 摄氏度、5% 二氧化碳湿度培养箱中 30 分钟。完成后，从培养箱中取出湿度载玻片室并将其转移到生物安全柜中。使用吸头，小心地从每个孔中吸出上清液，而不会干扰细胞单层。
之后，使用无菌滴管移液管将一滴PBS滴入每个孔。小心地吸出PBS，并将每张载玻片转移到装满PBS的Coplin罐中。接下来，将载玻片放回湿度室盒中。
将 50 微升适当的抗人抗体偶联物施加到每个孔中，并在潮湿的培养箱中孵育 30 分钟。在孵育结束时，将湿度室转移到生物安全柜中。使用吸液吸头吸出上清液。
之后，使用无菌滴管移液管将一滴PBS滴入每个孔。取出PBS后，在Coplin罐中洗涤载玻片两次，总共15分钟。清洗后，让载玻片风干，然后用安装介质安装盖玻片。
取载玻片并在荧光显微镜下阅读。将样品从阴性分级到四加分级，阴性样品显示无荧光，四加样品显示亮绿色荧光。分配由稀释因子表示的样品和终点值，在该稀释因子下，样品显示 1 到 2 加的等级。
初次接种疫苗后，在患者样本中观察到高水平的免疫球蛋白 M 和 G。接种疫苗大约六个月后，患者样本中两种抗体的水平都明显降低，但免疫球蛋白M水平几乎完全下降。接种疫苗 18 个月后，患者样本中未检测到免疫球蛋白 M 抗体。
免疫球蛋白 G 水平持续存在并保持在从两周时间点开始下降后的六个月时间点检测到的水平。
