通过麻醉和绝育大鼠开始收获新生儿供体心脏,并在12.5倍手术显微镜下用15刀片手术刀在剑突处做一个水平切口。接下来,用剪刀在两侧横向向上创建垂直切口,直至腋窝。在颈部下方用另一个水平切口切除前胸壁。
用剪刀夹层下腔静脉(IVC)、左右上腔静脉(SVC)和肺血管。使用 7-0 丝线缝合并结扎暗沉的血管。用镊子轻轻向下推隔膜,并通过用 30 号针刺穿 IVC,将 3 毫升冰冷、高钾改良的 Krebs-Henseleit 溶液施用到右心房。
用剪刀剪断 IVC、SVC 和肺血管。使用 11 号刀片手术刀尽可能横切肺动脉和头臂干远端的主动脉,以确保适当的长度。使用三毫升注射器用冰冷的心脏麻痹溶液冲洗心脏。
将麻醉的大鼠放在倾斜的架子上。用绳子固定其门牙,并将头部朝向外科医生。将颈部外侧的灯放在声带区域。
用两根手指抓住舌头,轻轻地向上和向左推,以获得最佳插管视野。现在,对 100 至 150 克的大鼠使用 18 号、2 英寸的套管,并用胶带固定气管插管。将插管插管连接到小动物呼吸机,并按照制造商的说明根据动物的大小调整设置。
插管大鼠后,使用15刀片手术刀进行中线剖腹手术,以切开皮肤。用剪刀打开前腹壁,将肠道向右上腹调动。接下来,使用棉尖涂抹器暴露腹膜后腹主动脉和 IVC。
用温热的盐水浸泡的纱布覆盖肠道,并使用牵开器保持IVC和腹主动脉的最佳暴露。现在,对肾下IVC和腹主动脉进行钝性解剖,直至分叉处。用 10-0 尼龙缝合线结扎钝的肾下分支动脉和静脉。
将收获的供体心脏在含有Krebs-Heneseleit缓冲液的无菌手术盆中运输到手术区域。确保用冰冷的心脏麻痹溶液间歇性地冲洗供体心脏。接下来,用微型剪刀分离肺干和降主动脉,并用冰冷的心脏麻痹溶液冲洗供体心脏。
接下来,将四个无创伤性血管钳夹应用于肾下主动脉和IVC的远端和近端节段。使用微型剪刀进行主动脉切开术,进行两个小的水平切口。然后,将供体心脏放在主动脉的左侧。
用缝合线固定接受者的肾下主动脉和供体的升主动脉,并在主动脉切开术的 12 点钟和 6 点钟位置一侧。在三点钟和九点钟位置进行第三和第四次缝合,在第三次缝合后轻轻地将心脏翻转到主动脉左侧。通过在每个间隙添加一到两条缝合线来完成动脉吻合。
现在,逆时针旋转大鼠,使头部朝向外科医生的左手。将供体的心脏移至腹主动脉的左侧,以获得 IVC 的最佳视野。对IVC进行静脉切开术,略靠近主动脉吻合口。
使用11刀片进行穿刺,并使用微型剪刀根据供体的肺干直径调整大小,用肝素盐水冲洗腔内腔。接下来,通过在血管后壁上放置中断的 11-0 尼龙缝合线,从 12 点钟和 6 点钟位置开始,在受体的 IVC 和供体的肺干之间进行静脉吻合。在前壁上放置连续的 11-0 尼龙缝合线,将可吸收明胶海绵条放在吻合口上,然后从远端开始移除微血管夹。
确保冠状动脉血管充满,并且供体的心脏在松开近端钳夹后不久开始跳动。使用棉尖涂抹器在海绵上轻轻按压,以达到最佳止血效果。小心地将肠道放回腹部,注意不要扭曲动脉和静脉吻合口。
关闭腹壁,让动物恢复。图中显示了在右心室和左心室中段切除的供体移植物的水平切片。组织学分析表明,心内膜弹性纤维组织具有大量的有组织的胶原和弹性蛋白纤维。
心内膜弹性纤维组织,VE-钙粘蛋白和α-SMA双重染色。CD-31、磷酸化 SMAD2 和 SMAD3、CD-31 和蛞蝓或蜗牛表明内皮向间充质转化。