Treatment of the Monocyte-Derived Dendritic Cells (Mo-DCs) with Sialidase

收集约10乘以10至第六的人单核细胞来源的树突状细胞从单核细胞分化而来。从具有 1.3 乘以 10 的 24 孔板的 10 个孔到每孔第 6 个细胞，将它们转移到新的无菌 15 毫升锥形管中。在室温下以 300G 离心细胞 5 至 7 分钟后，使用正常断裂，弃去上清液以除去死细胞和碎片。

向试管中加入 10 毫升含有 11.1 毫摩尔葡萄糖的 RPMI 1640 培养基。在室温下以300G离心4分钟后，使用正常断裂，再次弃去上清液。向细胞沉淀中加入两毫升RPMI 1640培养基，并将一毫升细胞悬液分成两个新的无菌微管，标记为一号和二号。

在微管一中，加入 500 毫单位来自产气荚膜梭菌的唾液酸酶。将两根试管在 37 摄氏度下孵育 60 分钟。孵育后，将细胞从两个微管转移到相应的新的15毫升锥形管中，标记为一号和二号。

然后向每个锥形管中加入约4毫升含有10%FBS的完全RPMI 1640培养基。使用正常断裂在室温下以 300G 离心管 4 分钟，并向沉淀中加入 5 毫升完全 RPMI 1640 培养基。每孔铺板一毫升细胞。

通过流式细胞术和共聚焦显微镜评估Sailidase处理降低人单核细胞来源的树突状细胞表面唾液酸含量的有效性。赛利达酶处理显著降低木果凝集素与接骨木凝集素结合，同时增加花生凝集素凝集素染色。Sailidase 处理后黑接骨木凝集素染色的减少表明细胞表面的接骨木凝集素染色显着减少。