首先，打开显微镜、光源、相机和抽吸系统。为了清洗灌注系统，在第一个腔室中使用林格氏溶液，在第二个腔室中使用补充有吡啶硫酮的林格氏锌溶液。关闭水龙头后，用相同的溶液填充腔室。
要开始样品制备，请将灌注室的窄边朝上放置，并在凹槽周围涂上密封硅胶。然后，使用细镊子，将 13 毫米的盖玻片从槽顶部的洗涤液中转移出来，细胞朝下。将 22 毫米盖玻片放在 13 毫米盖玻片的顶部，然后使用镊子拧紧，注意不要使盖玻片破裂。
翻转腔室并按下它以释放液体。然后，用 100 微升林格洗涤液填充凹槽并再次按压，确保没有泄漏。将灌注室安装并固定到平台上。
然后，连接灌注管和抽吸管，用于在凹槽中的细胞上灌注。将灌注速率更改为每分钟约两毫升，然后打开林格溶液灌注。对于测量，请打开成像软件。
使用显微镜的左侧按钮将显微镜放大倍率设置为10X。选择“实时取景”后，使用操纵杆移动平台并聚焦于凹槽中的单元格。为 mCherry 选择适当的波长。
细胞聚焦后，移动平台以选择合适的细胞贴片。选择绘制 ROI 下拉菜单。选择 Draw Circular ROIs 并在具有表达 mCherry 的细胞簇上绘制 ROI。
通过按住 Shift 按钮，然后按住并拖动现有 ROI，创建超出第一个 ROI 的新 ROI。选择 绘制方形背景 ROI 从下拉菜单中，然后调整背景 ROI 的位置和大小，其中单元格不存在。确保后台 ROI 中没有单元格后，转到 ND 采集选项卡。
选择“波长”子选项卡并选中其复选框。确保还选中了 GFP 波长的复选框。单击“时间”子选项卡，将测量间隔定义为每 5 秒一次，将持续时间定义为 30 分钟。
在显微镜面板上，按开以启用完美对焦系统或 PFS。在 ND 采集下，确保勾选 PFS on。调整焦点，然后单击立即运行。
使用 Ringer 溶液灌注开始基线期测量 90 秒。90 秒后，从 Ringer 溶液灌注切换到 Ringer 锌溶液灌注，并在荧光上升开始饱和后单击主界面面板右下角的红旗。用林格溶液改回灌注，直到实验时间结束。
要导出带有基线减法的数据，请按“背景校正”按钮，然后在“ND 采集”窗口中查看更改。单击“导出”按钮将数据保存在所需位置。荧光的增加是由于细胞内锌浓度的增加，而荧光的降低表明ZnT-1在细胞膜上转运锌的活性。
野生型ZnT-1的荧光曲线比突变体更平滑，这与细胞对锌负荷反应的变异性有关。比较野生型和delta USCTD活性的箱形图显示平均转运率相似，表明野生型和突变体之间没有差异。但是，价差的差异可能表明功能差异。
