要在适当布置的手术室内开始手术,请将麻醉的猪置于胸骨卧位,并确保所有连接的管路和管子都已固定。使用脱毛膏去除指定用于伤口的剃须区域的任何残留毛发。对伤口部位进行消毒后,使用无菌烧伤模板和手术皮肤标记标记该区域。
通过将控制单元上的设定点调整到 150 摄氏度来设置燃烧器。低设定点为 145 摄氏度,高设定点为 155 摄氏度。使用连接到烧伤装置的加热不锈钢块,通过将块放在皮肤上 60 秒来形成全层烧伤伤口。
拍摄猪的整个背部的数码照片,包括一张标有猪识别时间点和日期的标语牌。然后分别为每个伤口拍摄图像,以及一把尺子和一张标语牌,上面显示猪ID、伤口ID和时间点。要使用激光散斑成像或LSI实时评估伤口微血管灌注,请使用LASCA血液灌注成像仪在单次记录中对所有伤口进行成像。
要测量经表皮失水或 TEWL,请在 TEWL 探针尖端上放置一个干净的探针盖,该探针尖端将与伤口组织接触。测量每个伤口五次,首先在中心,然后是每个角落。然后将所有读数导出到电子表格中。
通过用超声探头从中线或脊柱扫描伤口来执行谐波超声或HUSD映射,从正常皮肤开始,然后向伤口上方的猪的外侧移动,直到再次到达正常皮肤。在 B 模式和组织弹性成像模式下遵循每个伤口的扫描模式。在 B 模式和弹性体模式下对每个伤口进行成像后更改注释,即每个伤口记录两次。
完成所有成像后,用透明薄膜敷料或测试敷料单独覆盖烧伤伤口。然后在整个伤口区域放置一层更大的透明薄膜敷料。在猪的整个躯干周围松散地涂上第二层卷纱布,以吸收伤口渗出的任何液体。
用一层柔性弹性绷带松散地覆盖纱布。用最后一层四英寸的松紧带覆盖松紧绷带。包扎完成后停止使用麻醉气体后,让猪保持氧气至少五分钟。
为了在烧伤后第三天接种烧伤伤口,使用移液管将接种物分散在暴露伤口的表面上,并使用一次性撒布器将其均匀涂抹。为了收集组织活检以在成像后进行分析,用 0.5% 布比卡因浸润伤口周围区域。使用带有 10 号刀片的一次性手术刀,从伤口的一侧边缘到另一侧切出一条 3-4 毫米宽的条带,在两侧保留正常皮肤的小边缘。
从伤口床或伤口边缘切出 6 毫米的穿孔活检。收集样本后,用无菌纱布轻轻按压伤口,实现止血。如前所述,用不粘附的敷料覆盖伤口并包扎。
苏木精和伊红染色对活检样本的分析显示所有组织学皮肤层均发生变形和坏死。在接种后第7天通过菌落形成单位进一步验证建立的生物膜。扫描电子显微镜成像和免疫荧光染色。
烧伤创面在接种后第7天创面上显示一层厚厚的生物膜,证实了感染和生物膜的建立。到第 14 天,伤口面积开始缩小,但到第 56 天观察到未完全愈合至原始伤口大小的 25% 左右,表明伤口慢性化。TEWL 进一步证实了伤口慢性化和伤口愈合受损,在所有测量时间点都显示出高经表皮水分流失。
紧密连接蛋白 ZO-1 和 2 的抑制以及皮肤屏障功能的恢复受损也证实了这一点。