Production of Composite Plants by Agrobacterium rhizogenes-Based Hairy Root Transformation

首先收集野生大豆，南美南瓜和当地南瓜品种的种子。将种子播种在一厘米深的蛭石中，并彻底浇水。在相对湿度约为70%的生长室中培养它们。

从 80 摄氏度的冰箱中取出根茎菌株 K599，并在 28 摄氏度的固体 LB 培养基上激活 48 小时。然后选择菌株K599的单个克隆，并将其在一毫升含有LB培养基的液体抗生素中培养12小时。将500微升细菌悬浮液均匀地散布在含有LB培养基的固体抗生素上，并在28摄氏度下孵育24小时。

七天后，当幼苗子叶展开时，使用消毒的锋利手术刀切割约0.5至1厘米的下胚轴。丢弃主根和下胚轴的一部分。用K599细菌涂覆下胚轴切口。

在潮湿的蛭石中种植幼苗，并使用根茎介导的毛根转化感染每个物种的 30 株植物。然后在四分之一强度的Gamborg B5碱性培养基中用五毫升重悬的K599细菌悬浮液浇灌植物。用透明塑料袋盖住花盆，并将它们放入生长室中。

接种后种植植物约12天。此时，应在切口部位产生新的毛根，通常达到两到五厘米的长度。使用具有540纳米绿色激发光和600纳米发射的CAMI发光成像系统，检测报告基因DsRed2的表达。

野生大豆、南美和南瓜复合植物在自然和绿色激发光下的根系可视化。