首先,对先前在脑室内注射释放鸡尾酒的麻醉大鼠进行皮下镇痛。将大鼠安装在立体定位框架上。使用耳杆固定头部,确保向前和向后旋转运动不受阻碍。
将头部向下稳定 40 度角,以适当伸展颈部后部。用剃须刀剃掉颈部毛发,然后用无菌棉签交替用三轮 10% 聚维酮碘和酒精对皮肤进行消毒,每次向不同方向摩擦三到五秒钟。用指尖识别枕骨突起和寰椎之间的圆形可抑郁区域。
用记号笔标记这个点。将一毫升注射器固定在立体定位框架上。将针头定位以接触标记处的皮肤。
使用镊子,抬起皮肤,同时将注射器插入皮肤层。轻轻拉回柱塞,在注射器内产生负压。逐渐插入针头,直到注射器中可见脑脊液。
将针头稳定在这个位置,让脑脊液缓慢流动。缓慢取出最多 120 微升的脑脊髓液。小心地取回注射器。
腹膜内给予一毫升正常血清以支持实验动物的液体补充。将液体活检与 400 微升神经干细胞培养基混合,并将微量离心管储存在 4 摄氏度以备后用。然后将动物转移到术后监测区。
挤奶活检产生的神经干细胞培养物平均有 3.17 次传代潜力,甚至达到 9 次传代。将收集的细胞接种在Poly-D-赖氨酸包被的孔上,在那里它们作为贴壁单层生长,很少作为神经球生长。GFAP阳性的新鲜分离细胞对静态标记ID3也呈免疫阳性,并具有NSE双极形态特征。
活检来源和死后来源细胞的免疫细胞化学比较表明,收集的细胞的特征与内源性室管膜下区细胞相似。生长因子导致两个样品中 SOX2 细胞的伴随且显着增加,双皮质素阳性神经母细胞减少。