Two-Photon Imaging of Zebrafish Forebrain

打开激光并等待 30 分钟，让电源稳定下来。将样品的波长设置为 920 纳米，功率设置为大约 50 毫瓦。将带有头部束缚斑马鱼的记录室放在实验平台上。

将物镜放置在靠近前脑表面的位置。要进行行为记录，请打开水箱两侧的 810 纳米红外灯。选择VR显示的输入源，然后开始记录数据。

然后，打开激光快门并启用照片倍增管。逐渐抬高物镜，直到露出背侧前脑。使用压电陶瓷促动器采集多个深度的图像，以增加记录的神经元数量。

双光子钙成像通过完整的头骨记录前脑背侧深达 200 微米的单个神经元活动。成像范围包括古区域、Dm、cDc、rDc 和部分 Dl 覆盖 30% 的成年斑马鱼前脑。在脑成像过程中执行同步行为记录可以识别运动输出的神经元相关性。

在成像过程中，尾巴运动不应导致可见的运动伪影。