小鼠胚胎下丘脑提取、采集和组织解离

首先使用本生燃烧器对三个牧场移液器进行火抛光，以减小直径。接下来，用70%乙醇对安乐死的怀孕小鼠母亲的腹部进行消毒。切开从耻骨合成到肋骨剑突的腹腔。

现在，从腹腔中提取子宫角并将其放入装有冰冷HBSS溶液的100毫米平板中。使用细镊子从洗涤的子宫中提取并分离所有胚胎。快速斩首提取的小鼠胚胎，并将头部放入装有HBSS的60毫米培养皿中。

在眼腔中放置一对细镊子以容纳大脑。用另一对，剥皮皮肤和头骨，直到大脑可见。从头骨的嗅球中挖出大脑并将其倒置。

观察腹侧的皮层和背侧的下丘脑。使用弯曲的镊子去除脑膜和血管层，直到大脑看起来白色和清晰，并将下丘脑区域与大脑的其余部分分开。将下丘脑切成三到四小块细块，然后用移液管将这些碎片转移到15毫升的管中。

接下来，用六毫升HBSS填充试管。然后在组织沉淀并去除上清液后加入酶混合物 1。将试管在 37 摄氏度的水浴中孵育 15 分钟，每五分钟搅拌一次以重新悬浮组织。

现在，加入 30 微升酶混合物 2，并通过用大直径牧场移液管上下移液 10 次来解离组织。再孵育 10 分钟后，加入剩余的 15 微升酶混合物 2。利用两个直径减小的火抛光移液器，将组织移液10次。

立即向管中加入10毫升含有0.5%BSA的HBSS。然后在室温下以300G离心管10分钟。吸出上清液并将细胞沉淀重新悬浮在含有0.5%BSA的一毫升HBSS中。