首先用 75% 酒精喷洒适当安乐死的小鼠以对皮肤进行消毒。然后将鼠标置于仰卧位。抬起动物腹部区域的皮肤,然后用手术剪刀在其中做一个小切口。
然后用剪刀,沿着腹侧中线,将皮肤和腹部肌肉从骨盆到颈部钝性分开。通过沿中线两侧切割横膈膜和肋骨来暴露心脏和肺部。接下来,小心地切除肝脏、脾脏、肠道和肾脏,避免损伤肠壁。
之后,切除肺和食道。现在用一只手拿着的镊子轻轻抬起心脏,另一只手拿着手术剪刀将主动脉与脊柱分开。然后将心脏和主动脉放入 60 毫米的培养皿中,培养皿中含有补充抗生素的 PBS。
从酒精中取出显微外科镊子和显微外科剪刀,并用 25 毫升 PBS 冲洗以去除多余的酒精。在立体显微镜下工作,从心脏和主动脉中取出胸腺和其他组织。然后切除心脏,留下主动脉和血管周围脂肪组织或 PVAT。
将主动脉与 PVAT 一起转移到含有补充抗生素的 PBS 的干净 60 毫米培养皿中。使用一对显微手术镊子握住主动脉,然后使用另一对拉下附着的脂肪组织,将PVAT与主动脉分离。尽可能多地去除血管组织,同时对 PVAT 造成最小的伤害。
最后,将收集的PVAT转移到两毫升微量离心管中,该管含有补充抗生素,高葡萄糖,DMEM,置于冰上。