Surgical Protocol for the Selective Photoconversion of Lung Metastases

在准备手术的小鼠后，确定目标区域，胸骨左侧7毫米，肋下缘上方约7毫米。使用镊子将皮肤提升到确定的区域，并使用锋利的显微解剖剪刀做一个 10 毫米的圆形切口，仅切割皮肤。然后取出肋骨上的软组织，并用烧灼笔烧灼两端的任何主要血管。

用镊子抬高第六或第七肋骨，并使用钝显微解剖剪刀的单个刀片刺穿肋间肌。现在轻轻旋转剪刀，在肋间隙做一个大约 10 毫米的切口，同时避免与肺组织和肋骨接触。在手腕或手上轻轻释放压缩空气，以确定合适的流动强度并清除喷嘴中的碎屑。

然后在切口处喷洒短时间的空气，以避免造成肺损伤。用镊子抬起第六或第七肋骨，将牵开器插入肋间切口，刀片平行于胸壁。然后小心地松开手柄，让牵开器打开并逐渐露出肺部。

现在将两到三滴加热至 37 度的无菌 PBS 滴在暴露的肺组织上，以防止其干燥。在鼠标上覆盖一块带有小切口的铝箔，将其直接放置在暴露的肺组织上。确保切口仅显示开放的胸部和附近的组织，以便进行有针对性的肺照片转换。

接下来，在鼠标和铝箔上放置一个带有切口的盒子，确保切口与暴露的肺部对齐。并将照片转换指示灯直接放在盒子上的切口上方。然后激活光转换灯以连续六分钟照亮暴露的肺组织。

照片转换后，停用灯泡并清除灯盒和铝箔面罩远离鼠标。通过在手腕处排出空气，然后在胸口处排出空气，将肺与胸壁分开。牢牢抓住卷收器手柄并挤压它以关闭刀片。

小心地将闭合的牵开器移出肋间隙，确保不接触肺组织。然后使用5-0真丝缝合线，用简单的连续缝合模式闭合肋间切口，确保切口两侧的肋骨并入。用力拉动缝合线，确保伤口边缘对齐，重新建立胸壁的完整性。

通过将末端打结四次来固定缝合线。将缝合线尾部修剪得尽可能靠近结，并使用手术钉闭合皮肤。要去除胸腔中多余的空气，请在剑突下方插入带有 28 号针头的 1 毫升注射器。

将注射器拉回约一毫升。从鼠标上取下注射器并排出空气。显示了在蓝光暴露前暴露的 Dendra2 表达肺转移的图像。

将表达肺转移的Dendra2暴露在蓝光下表明，在离体和体内样品中，六分钟的暴露在光转换通道中产生了最亮的信号。在蓝光照射下接受手术的小鼠的所有三种组织类型中鉴定出光转换和非光转换细胞。在没有蓝光照射的情况下接受手术的小鼠组织中仅发现非光转换的肿瘤细胞。