Patch-Clamp Recording to Study the Electrical Responses of Motor Neurons to Spinal Cord Stimulation

首先，将准备好的脊髓切片放入记录室。然后将显微操作系统的阳极放置在阴极背中线附近，靠近背根进入区，以便正确定位脊髓刺激器。现在切换到 60 倍物镜，以识别具有光滑明亮表面而没有可见细胞核的健康神经元。

稍微降低红外强度，打开荧光光源，将滤光片调整为宽带紫外激发选项。现在，选择一个合适的氟金正运动神经元，并逐渐降低电极，直到它靠近神经元。当移液器接触其表面时，在吸头水平处寻找一个小的膜压痕，并释放先前施加的正压。

然后使用注射器对移液器施加负压，并等待软件界面上的电阻值上升到千兆欧。将膜电位夹在负 70 毫伏。按下放大器软件界面上的快速电容补偿按钮，然后施加短暂的负压使细胞膜破裂，然后按下放大器软件界面上的慢速电容补偿按钮。

施加脊髓刺激一到两秒钟，将振幅保持在 1 到 10 毫安之间。通过逐渐增加刺激幅度来确定运动阈值，直到观察到第一个动作电位。在电流钳位模式下，使用流变基周围的五秒去极化电流注入来区分延迟和立即放电的运动神经元。

关闭脊髓刺激后，继续记录膜电位以捕获自发动作电位放电。当脊髓刺激的振幅升高时，膜电位增加，并且每 10 至 20 个脉冲触发一次动作电位。脊髓刺激关闭后，神经元在短时间内发射一系列自发动作电位。

然后，静息膜电位恢复到负 65 毫伏。