Seeding CD34+ Cells into Fluidic Chips

首先，离心分离的CD34阳性细胞，并将细胞沉淀重悬于补充有混合4种细胞因子的300微升预热SFM-34培养基中，并使用10微升细胞悬液对细胞进行计数。在以最终体积为 150 微升的细胞因子补充的 SFM-34 中计数并重悬细胞后，向其中加入 0.5 微升 ROCK 抑制剂。通过将P200移液器的尖端放在通道边缘的储液器内，从流体芯片中缓慢吸出层粘连蛋白。

然后将细胞悬液一致地添加到通道中，确保不会形成气泡。将芯片在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育过夜，使细胞完全附着在通道上。当内皮细胞完全附着时，如前所述吸出培养基。

在芯片中加入 200 微升补充细胞因子的 SFM-34。每天更换培养基，直到细胞达到 90% 至 100% 汇合度。