首先，准备四张滤纸，每张尺寸为 12.5 x 7.5 厘米。将两张纸堆叠在一起，然后将纸堆放在转印缓冲液中浸泡。将PVDF膜置于95%乙醇中，并在摇床上搅拌膜一分钟。
收集乙醇。将膜浸入转印缓冲液中。并搅拌两分钟。
接下来，将浸泡的滤纸堆放在平坦、可移动的表面上，例如大盖子，然后用滚筒将其压平。使用凝胶释放剂或镊子，小心地将 PVDF 膜放置在堆栈上。然后，将单张干燥滤纸放在该膜上，然后将滚筒滑过纸以吸收膜表面多余的缓冲液。
取下顶部滤纸，不要与膜摩擦。从冰箱中取出分离的纤维样品并在室温下解冻，然后离心并彻底重悬样品。将每个样品的一微升液滴放置在指定膜区域的中心。
避免用移液器吸头接触膜。让样品液滴完全吸收到膜中 15 分钟。然后使用凝胶释放剂或镊子，小心地将膜从广告中取出amp 滤纸堆。
将其放在干燥的滤纸上，静置至少五分钟以脱水。样品斑点完全变白后重新激活膜。然后继续对靶蛋白进行免疫标记。
了解如何使用信号面板强度对斑点印迹图像中 MHC 亚型和肌动蛋白信号的强度进行分类。强、中、少靶蛋白检测分别表现为饱和、中、弱信号。对于纤维类型鉴定，首先比较肌球蛋白重链IIA和肌球蛋白重链一的结果。
记录仅显示具有饱和或中等信号强度的单个肌球蛋白重链亚型的纤维。记录用肌动蛋白检测到的纤维，并且未检测到肌球蛋白重链一或 IIA 作为潜在的 2X 型。如果存在微弱的肌球蛋白重链亚型信号和中度去饱和的肌动蛋白信号，则将其记录为未识别。
丢弃含有微弱或未检测到的靶蛋白的样品。同时显示 MHCIIA 和 MHC1 饱和或中度信号的纤维不应用于纤维类型特异性制备。在 MYO1D ID 之后，通过将纤维与相应 MHC 亚型的饱和或中等信号相结合来制备 1 型和 2 型样品。
使用10微升每种纤维类型特定的样品，并按照制造商的指南，通过SDS页面在预制凝胶上分离。按照制造商的方案，使用凝胶成像仪检测目标 MHC 亚型。比较所有光纤类型特异性样品中每种MHC亚型的信号强度。
在中等或饱和信号强度下，由正确的 MHC 亚型确认光纤类型 ID。斑点印迹的免疫标记可以鉴定 2 型纤维、1 型纤维和潜在的 2X 型纤维。使用蛋白质印迹和肌球蛋白重链特异性抗体对纤维类型特异性样品进行了验证。
