制备用于体内基质凝胶塞测定的血管细胞

首先使用460毫升内皮细胞培养基制备完整的内皮培养基，并在其中加入50毫升FBS，5毫升青霉素链霉素和5毫升内皮细胞生长补充剂。制备好的培养基可以在4摄氏度下储存一个月。接下来，在含有 010 万个血管细胞的 100 毫米组织培养皿中，用 8 毫升制备的完全内皮培养基，并在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下培养细胞，直到达到 70% 的共流畅度。

然后，从培养皿中取出培养基并用PBS冲洗细胞两次，以消除未附着的细胞和碎屑。去除PBS后，向细胞中加入3毫升含有2.21毫摩尔EDTA的0.25%胰蛋白酶，并在37摄氏度下孵育培养皿一分钟。在40倍放大倍率的光学显微镜下验证细胞分离。

用 7 毫升完全内皮培养基中和胰蛋白酶，然后轻轻冲洗培养皿中的细胞。将细胞悬液收集在15毫升管中以400G离心10分钟后。除去上清液后，将细胞重新悬浮在5毫升完全内皮培养基中，然后使用血细胞仪对细胞进行计数，并将含有200万个细胞的悬浮液的计算体积转移到无菌的1.5毫升管中。

在除去上清液之前，通过将悬浮液以400G离心5分钟来沉淀细胞。血管细胞现在已准备好与基质凝胶混合，用于基质凝胶塞测定。