首先,通过将 M199 粉末溶解至 10 倍浓度在 90 毫升去离子水中,然后加入 10 毫升 FBS,制备 10 倍 M199 培养基。通过0.22微米过滤器过滤溶液。过滤后的介质可在4摄氏度下储存长达两个月。
为了制备含有血管细胞的基质凝胶,使用约200万个血管细胞。在冰浴中冷却含有适当制备的细胞沉淀的无菌1.5毫升管。在冰浴中完全解冻基质凝胶,不要混合或涡旋。
同样,将制备的 10 倍 M199 培养基与感兴趣的测试试剂或药物一起冷却至 4 摄氏度。接下来,保持8.8比1比0.2的体积比,将预冷的基质凝胶与含有10%FBS的预冷10倍M199培养基和预冷的测试试剂混合,生产基质凝胶混合物。最后,通过轻轻混合将预冷的细胞重新悬浮在400微升制备的基质凝胶混合物中,以避免形成气泡。
将含有基质凝胶中的细胞的试管放在冰上,直到小鼠准备好进行基质凝胶注射。