Liberase-Based Enzymatic Purification of Microglial Cells Isolated from a Mouse Spinal Cord

首先，用手术刀沿着安乐死小鼠的背中线从枕骨到骶骨区域切开一个切口。使用立体手术显微镜，仔细解剖各层，直到腰椎。确定最后一个肋弓。

确定最后一个颈椎和骶骨。然后做一个切口以分离脊柱。用一把解剖钳，对椎骨进行背侧椎板切除术，以提取脊髓。

切除通过孔出现的构成周围神经系统的神经。现在，将提取的脊髓放在解剖板上。用一把vannas剪刀，将其切成两毫米大小的碎片。

然后将碎片转移到两毫升平底微管中。向微管中加入一毫升HBSS-LD工作溶液。将混合物在 37 摄氏度下孵育 25 分钟。

确保每五分钟剧烈涡旋一次混合物。接下来，将每个消化的内容物通过一个 40 微米大小的过滤器。然后加入7毫升含2%FBS的HBSS中和消化，压碎剩余组织。

将悬浮液转移到 50 毫升锥形管中，然后在 4 摄氏度下以 220 g 离心 5 分钟。现在使用一毫升微量移液器弃去上清液。然后将沉淀重悬于新的 15 毫升锥形管中的两毫升 HBSS-FBS 中。

向试管中加入两毫升 90% 等渗密度梯度培养基，并在 18 摄氏度下以 160 g 离心混合物 25 分钟。最后，使用移液管取回间相并将其转移到 15 毫升锥形管中。用 10 毫升 PBS 洗涤细胞，然后在 5 摄氏度下以 220 g 离心细胞 5 分钟，然后再进行进一步实验。

通过FACS染色证实，提取的小胶质细胞的纯化产生了高达99%的细胞产量。观察到平均大小为 10 微米的双阳性细胞，与未活化的小胶质细胞一致。