首先,将麻醉的供体小鼠置于高倍显微镜下。使用一把剪刀,从剑突到耻骨合成进行中线剖腹手术。然后在肋骨下方做一个横向切口,形成一个十字形图案。
缩回剑突后,将肠子内脏取出,并将其放在腹腔左侧的湿纱布海绵上。为了动员肝脏,将其与所有韧带附件分开。一旦暴露了适当的肝动脉或 PHA,使用弯曲的镊子将其骨架化。
结扎PHA后,解剖胆总管或CBD的整个长度。将胆管支架插入 CBD 并用 10-O 尼龙缝合线固定,然后结扎 CBD 的远端。使用湿纱布海绵,将右肝叶缩回剑突,暴露下腔静脉(IVC)。
将肝下腔静脉(IHIVC)从腹膜后移开,烧灼右肾上腺静脉。一旦右肾动脉和静脉被解剖和结扎,切断两者和剩余的韧带附着。切除右肾后,通过门静脉或PV注射0.5毫升冷组氨酸色氨酸色氨酸酮戊二酸溶液和100单位肝素。注射一分钟后,切开脾和肠系膜上静脉上方的门静脉。
为了灌注肝脏,将冷组氨酸色氨酸酮戊二酸保存溶液缓慢注射到 IHIVC 中,直到来自 PV 的液体清澈。在右肾静脉上方的 IHIVC 上放置一个微型夹子或细缝合线,并在夹子的下方切割。一旦CBD被切到支架的远端,用10-O尼龙缝合线识别并结扎囊性导管。
用镊子抓住胆囊的圆顶,然后用弹簧剪刀剪开缝合线上方的囊管,完成胆囊切除术。将肝脏向下缩回以暴露肝上下腔静脉或SHIVC,并将其切开,为受体小鼠的吻合保留足够的长度。移除额外的韧带附件后。
将肝脏放入冷盐水中。