首先,取准备好的人类粪便样本。将高速冷冻离心机冷却至4摄氏度。使用PBS将样品管的重量调节至0.1克,并在4摄氏度下以3, 000g离心20分钟。
使用塑料移液管,将上清液转移到两个 50 毫升管中,留下 1 毫升。然后,将上清液在12, 000 G下在4摄氏度下离心30分钟。使用20毫升注射器,吸出上清液,然后从注射器中取出针头。
通过 0.22 微米过滤器将液体过滤到 50 毫升管中。接下来,用 75% 的酒精擦拭桶以消除任何残留的污染。将大约30毫升过滤的粪便上清液转移到超速离心管中。
用大约 8 毫升的 PBS 填充试管,在试管开口处留出 3 毫米的间隙。将两个超速离心管放在相对的超速离心桶中,并使用PBS平衡两个桶的重量。将所有铲斗装载到转子上,无论它们是否装有管子。
将样品放入离心机中,启动真空并在 160, 000 G 下以 4 摄氏度旋转 70 分钟。离心完成后,立即释放腔室真空并打开超速离心机的门。然后,立即拆下转子。
将铲斗从转子转移到机架上,然后使用钳子拾取管子。弃去上清液,保存可见的棕色颗粒。加入 1 毫升预冷的 PBS,使颗粒完全重悬。
用大约 37 毫升 PBS 填充试管,从开口处留出 3 毫米的间隙。进行另一轮超速离心后,弃去上清液,让试管倒置5分钟。用雨刷器清除内壁上残留的溶液。
使用 1, 000 微升移液管,加入 1.2 毫升预冷的 PBS 以重悬沉淀,并通过移液混合。将 1.2 毫升 PBS BEV 溶液从一个超速离心管转移到干净的 1.5 毫升微管中。