首先，取 500 微升制备的 PBS/BEV 溶液。将其与三毫升 PBS 混合，并使用 1， 000 微升移液管轻轻混合。将 31 毫升超速离心管放在带孔的泡沫板上，并用向下箭头标记管。
然后垂直握住1,000微升移液管，并在管底部加入3毫升50%碘克沙醇溶液。将管架放在管开口下方的泡沫板水平上方，并将管子倾斜至 70 度角。使用1， 000微升移液管，在50%碘克沙醇溶液上加入3毫升40%碘克沙醇溶液。
然后将三毫升20%碘克沙醇溶液层在40%碘克沙醇溶液上。使用1,000微升移液管，在制备的20%碘克沙醇溶液上加入3毫升10%碘克沙醇溶液。接下来，在 10% 碘克沙醇溶液上加入 3.5 毫升 PBS/BEV 溶液，然后轻轻地将试管放回直立位置。
现在，将一个 31 毫升的超速离心管放在带孔的泡沫板上，并用向上的箭头标记它。使用1,000微升移液管，将2.5毫升60%碘克沙醇储备溶液垂直加入管底部，并将其与500微升PBS/BEV溶液混合，得到3毫升50%碘克沙醇BEV溶液。通过移液彻底混合溶液。
然后依次分层40%、20%和10%碘克沙醇溶液后，使用1000微升移液管在10%碘克沙醇溶液上加入3.5毫升PBS。用PBS将两根管子的重量调整为正负0.005克以内的总重量。接下来，将试管放在桶中，并在 4 摄氏度下以 160， 000 G 离心 7 小时。
使用移液器，将从梯度超速离心模式获得的馏分依次从上到下沿侧壁收集到 10 个单独的 38.5 毫升超速离心管中。然后将馏分在 160， 000 G 下在 4 摄氏度下超速离心 70 分钟。除去上清液，将超速离心管倒置五分钟。
接下来，使用200微升移液管将沉淀重悬于200微升预冷的PBS中。将 PBS/BEV 溶液转移到干净的 1.5 毫升微管中。标记从一种梯度超速离心模式获得的从F1到F10的馏分，然后进行分析。
