首先,使用塑料巴斯德移液管轻轻地将荧光染色的脑切片转移到玻璃底共聚焦培养皿中。用平衡的ACSF填充这些盘子。用铁网将大鼠脑切片固定到位。
接下来,将玻璃底部共聚焦培养皿放在共聚焦显微镜的载物台上。将急性脑切片放置在培养皿底部,并在成像过程中灌注平衡的ACSF。使用 40X 物镜,查看大脑皮质微血管系统的壁细胞。
接下来,使用兼容的软件捕获图像堆栈。根据脑微血管系统和周细胞的网络和形态识别它们,然后在每个脑切片上定位包含脑微血管系统网络的特定区域并捕获图像。在正常生理条件下,脑周细胞不会经历细胞死亡。
检测到未用碘化丙啶染色的活周细胞。SAH模型显示微血管系统内的重要周细胞。还检测到非活体周细胞。
碘化丙啶标记的非重要周细胞“仍然脱离到整个微血管系统。