Mouse Leptomeninges Dissociation and Enzymatic Digestion for Efficient Culturing of Leptomeningeal Cells

首先，小心地切开牺牲小鼠的皮肤，从头骨的开口开始，一直延伸到额叶区域。使用剪刀，在不损伤软脑膜的情况下，小心翼翼地抬起和取出头骨，收集整个大脑。将整个大脑浸入洗涤缓冲液中，轻轻冲洗以去除表面血液。

将大脑转移到无菌培养皿中，无需切碎。然后，在显微镜下，使用细尖镊子从大脑表面提取软脑膜。使用无菌显微剪刀，将软脑膜组织切成碎片。

使用给定的成分修复消化酶混合物。向片段中加入 10 毫升混合物，并在 37 摄氏度下孵育 15 分钟。轻轻搅拌以从管底部分离碎片。

然后，加入 10 毫升停止缓冲液。将悬浮液以 300 g 在 4 摄氏度下离心 5 分钟。并使用移液管，小心地除去上清液。

加入 10 毫升冷 PBS，并通过 70 微米过滤器将任何团块过滤到无菌的 50 毫升管中。将每平方厘米 10 至第五个细胞铺入装有 5 毫升培养基的纤连蛋白包被的 T25 烧瓶中，并在 37 摄氏度下用 5% 二氧化碳孵育 24 小时。孵育后，用新鲜培养基替换培养基以消除未附着的细胞。