首先将磁选机连接到其支架上。将选择柱连接到磁选机，并在选择柱的顶部放置一个 70 微米的电池过滤器。在选择柱下方放置一个 50 毫升的管以收集流量。
一旦小鼠脑细胞达到80%汇合度，吸出培养基并用PBS冲洗细胞。加入 0.25% 胰蛋白酶以分离贴壁细胞并在 37 摄氏度下孵育 5 分钟。然后添加停止缓冲区。
将细胞悬液以 300 g 离心 5 分钟，并除去上清液。对于抗体染色，将 10 个细胞重悬于 100 微升 PBS 中的七个细胞中。然后加入 10 微升 LYVE-1 抗体溶液并充分混合。
将混合物在 4 摄氏度的黑暗中孵育 30 分钟。孵育后，离心细胞并弃去上清液。然后通过加入一毫升PBS并以300G离心五分钟来冲洗细胞。
对于微珠标记，将沉淀重悬于 100 微升 PBS 和 20 微升微珠中。膨胀并在 4 摄氏度的黑暗中孵育 30 分钟。然后离心悬浮液并用一毫升PBS洗涤沉淀。
再次，离心并将沉淀重悬于四毫升PBS中，以排除磁性阴性。将细胞悬液通过 70 微米过滤器以消除团块。用三毫升PBS冲洗选择柱，制备选择柱。
然后将细胞悬液添加到选择列中。用三毫升PBS洗涤色谱柱，并将LYVE-1阴性细胞收集到50毫升管中。对于磁性阳性选择，将 6 毫升 PBS 移液到选择柱中。
然后通过将柱塞用力推入选择柱来冲洗磁性标记的细胞，以获得 LYVE-1 阳性 LEC。接下来，离心阳性细胞悬液并除去上清液。将每平方厘米 10 至第五个细胞铺入装有 5 毫升培养基的 T25 烧瓶中。
通过每隔一天更换 50% 的培养基来维持培养物。当细胞达到 80% 汇合度时，如前所述，在进行细胞传代之前将它们分离。流式细胞术分析显示，MACS后第2次传代LYVE-1阳性细胞的百分比与第3次传代无显著差异，表明纯度大于95%免疫荧光染色证实了LYVE-1与PDPN、VEGFR-3和PROX1的共染色，确立了LLEC的同一性。
LYVE-1阳性细胞不表达F48和血小板衍生的生长因子β，有效区分LEC，与巨噬细胞和成纤维细胞。MACS之前的软脑膜细胞表现出从圆形球体到融合纤维形状的异质形态。然而，在MACS后，LLEC表现出典型的内皮样特征，如纺锤体和鹅卵石形状。
