从人胰腺肿瘤细胞中分离细胞核进行多组测序

首先将先前解冻的胰腺肿瘤细胞悬液转移到两毫升微量离心管中，并加入 PBS 以达到 2 毫升的最终体积。然后，使用血细胞计数器评估细胞的数量和质量。通过离心获得细胞沉淀后，使用逐渐变小的移液器吸头，小心地倾析上清液，以尽量减少沉淀的分布，同时最大限度地倾析流体。

制备 1X 细胞裂解缓冲液，然后将其 100 微升加入 900 微升先前制备的细胞裂解稀释缓冲液中，得到 0.1X 细胞裂解缓冲液。将 100 μL 冷却的 0.1X 细胞裂解缓冲液转移到细胞沉淀中，轻轻移液 5 次以确保完全重悬。在冰上孵育三分钟后，将一毫升冷却的洗涤缓冲液加入重悬的沉淀中，并轻轻移液五次。

离心后，如图所示弃去上清液，并重复该洗涤过程两次。将台盼蓝染色悬浮液加载到血细胞计数器中以计数细胞核数。基于目标靶向细胞核回收，将细胞核沉淀重悬于1X细胞核缓冲液中。

小心地将重悬的细胞核通过40微米移液器吸头细胞过滤器，然后将其保持在冰上。现在重数原子核。使用这种方法获得的细胞核表现出适当的大小和形状。

可以观察到核包膜偶尔出现轻度点状，应在最终核评估时通过血细胞计数器进行监测。