首先，将具有AAV相关载体的小鼠注射到小鼠大脑中。注射病毒三到四周后，剃掉麻醉小鼠颈部的腹侧和背部区域。使用三个碘磨砂膏轮流用 70% 乙醇溶液清洁剃光区域。
在肩胛骨之间的皮肤上做一个腹侧切口。之后，将手术纱布放在切口上，并将动物置于仰卧状态，头部朝向外科医生。然后在颈部右侧锁骨上方做一个垂直小切口，露出右颈动脉和颈静脉。
分离皮下组织后，露出右侧颈外静脉，将缝合线置于静脉下。绑住颈静脉的远端以阻止血流。使用微型镊子和剪刀，在塌陷的静脉上做一个小切口。
现在，插入斜面朝下的静脉导管，并将其靠近上腔静脉，直到到达右心房。使用 7-0 真丝缝合线，将导管固定到血管上。解剖结缔组织，露出右侧颈总动脉。
在近端，预先放置两个 7-0 丝缝合线的缝合环，这些缝合环在颈内动脉和颈外动脉分叉的水平上保持松开。要暂时停止血液流动，请拉动预先放置的缝合环。然后，使用微型剪刀或 27 号针在血管壁上开一个小口。
松开缝合环的同时，将动脉导管插入近端，并在不接触主动脉瓣的情况下将导管推进至主动脉弓。使用两个预先放置的缝合线将导管固定到血管上。将所有导管皮下插入隧道，通过预先切割的切口将其在颈部后部外部化，然后闭合腹侧切口。
将导管连接到由 25 号针管制成的硅胶涂层管连接器的静脉或动脉端口。闭合腹侧切口后，当背部皮肤用缝合线密封时，皮下固定连接器。使用不锈钢手术线，用肝素盐水填充导管并紧塞导管的末端。
要在手术后 24 小时将动物连接到自动采血系统上，请将系绳钩连接到颈部后部的金属环并连接动脉管。将动脉导管连接到注射管路后，将静脉导管连接到取样管路。将注射时间和剂量设置为每公斤 0.5 毫克，每分钟 500 微升。
设置血液采样时间和频率，包括用生理盐水稀释样品。系统将自动补充等量的生理盐水以替换采样的血液。执行自动预注射。
接下来，以每分钟500微升的注射速率自动静脉注射药物氯氮平N-氧化物。然后进行注射后采血。介绍了在弓状核中单侧立体定向注射 AAV-hM3Dq-mCherry 的成年 Kiss1-EYFP 女性的黄体生成素模式。
发情期黄体生成素水平通常较低，但由于其脉动释放，通常会观察到变化。黄体生成素水平急剧上升是氯氮平N-氧化物注射的反应。大多数与 Kiss1-EYFP 共定位的 mCherry 神经元表明，病毒和神经元激活对目标人群具有特异性。
显示了发情期野生型小鼠的黄体生成素脉动释放模式，随后是对 Kisspeptin-10 的 IP 注射的反应。观察到清晰的黄体生成素脉冲，这是发情期女性的典型特征，显示基础黄体生成素水平较低。在Kisspeptin给药后，检测到黄体生成素的立即和强劲增加。
