In Vitro Blood-Brain Barrier Model Assembly for Measurement of TEER

首先，用PBS冲洗24孔板的上腔室。使用涡旋混合器将BEND3细胞与DMEM培养基混合以制成悬浮液。然后，在 24 孔板上腔室的 PET 膜上接种 200 微升 BEND3 细胞悬浮液。

向板的下腔室中加入1， 200微升完全介质，以稳定上下腔室的渗透压。通过用负压移液器从一侧缓慢去除旧介质并在流体交换过程中沿壁添加新介质来更换介质。在测量 TEER 之前，将电阻器、5% 次氯酸钠溶液、75% 乙醇和双蒸水放在超洁净台上。

打开紫外线照射 30 分钟以消除残留的细菌和病原体。将电极置于 5% 次氯酸钠溶液中，缓慢摇晃三到五秒钟。然后浸入75%乙醇中15分钟。

最后，转移到PBS或双蒸水中直至使用。接下来，打开电池电阻表背面的开关。单击“选择板”和“选择 24 孔板”。

根据操作情况，选择合适的检测顺序。将千欧电阻器插入右侧插头以校准仪器。如果校准结果为 1000 加减 5 欧姆，则认为仪器准确。

如果没有，请单击主界面上的模式单位以选择欧姆，然后单击校准。然后，拆下千欧电阻器，并使用连接线将其更换为测量电极。将电极垂直放入仅含有培养基的 24 孔板中，然后单击仪器上的空白处理。

没有固定电池的板电阻的背景值应约为 134.4 欧姆。接下来，将两个电极插入坐板的上腔室和下腔室中，使电池层位于它们之间。轻轻踩下踏板记录阻力值。

确保电极不接触上腔室和下腔室底部的电池。通过将电阻值乘以上腔室的底部面积来获得TEER值，如公式所示。绘制 TEER 与时间（以天为单位）的折线图。

当电阻值不随时间增加时，细胞就形成了屏障。绘制的 BEND3 细胞阻力值与时间的关系图显示，细胞 TEER 值在第 5 天开始稳定。