培养解冻的冷冻保存血液样本后，在室温下用所需的X射线剂量照射。然后，向每个孔中加入 1.62 毫升温热的 RPMI 培养基。为了刺激 T 淋巴细胞中的细胞分裂，向每个孔中加入 40 微升植物血凝素并彻底重悬。
将板在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育 23 小时。第二天，每孔加入 8 微升细胞松弛素 B 以阻断胞质分裂。70小时后，从培养箱中取出板，并将细胞悬液转移到15毫升管中。
用两毫升PBS冲洗每个孔，并将该PBS加入15毫升管中。将细胞悬液以 180 g 离心 8 分钟，弃去上清液，在沉淀上留下 500 微升。在涡旋沉淀的同时，向管中加入两毫升冷氯化钾。
再次，如前所述离心并弃去上清液。通过缓慢加入两毫升冷固定剂 1 涡旋沉淀，并在 4 摄氏度下孵育过夜。第二天，离心并弃去上清液。
在逐滴涡旋沉淀的同时，向试管中加入两毫升冷固定剂 2。将管子放在 4 摄氏度下过夜。离心样品并将上清液转移到另一个试管中，以根据沉淀大小浓缩细胞。
用异丙醇清洁载玻片并正确标记它们。涡旋沉淀后，在载玻片上加入 40 微升固定细胞悬浮液。干燥后，将载玻片浸入吖啶橙染色剂中一分钟。
然后，用蒸馏水快速清洗载玻片，然后将其放入磷酸盐缓冲液中一分钟。擦干载玻片的背面，然后将其放在干净的纸巾上。在载玻片上加入 20 微升磷酸盐缓冲液，并用干净的盖玻片盖住，避免气泡。
用硅水泥密封载玻片。将载玻片置于荧光显微镜下并检查双核细胞。最后，手动计数微核。
圆形双核细胞的存在表明成功从冷冻保存的全血样本中提取健康的活细胞。随着辐射剂量的增加，观察到微核产量呈线性二次增加。假辐照对照样品的背景微核产量主要由滞后染色体引起。
