校准极谱法氧传感器后，取下塞子并打开腔室。用 100% 乙醇、70% 乙醇和蒸馏水清洗塞子和腔室。将苍蝇转移到微量离心管中。
将 200 微升冷冻的 MiR05 缓冲液加入管中，并通过用杵轻轻施加压力四到六次来使苍蝇匀浆。使用微量移液器，将匀浆的苍蝇悬浮液转移到腔室中。用塞子盖住腔室，不要引入气泡。
接下来，单击布局菜单并选择选项 5，按校正体积流动。将打开另一个新窗口。在这里，在空间中，实验代码，命名实验。
在样品字段中，将每个样品命名为其各自的腔室 A 和 B.然后将单位字段设置为单位，在浓度字段中，将腔室体积定义为每毫升一个。要启动高分辨率呼吸测量，请确保氧通量信号稳定在正值上。加入洋地黄皂苷以通透线粒体膜。
然后加入丙酮酸、苹果酸和脯氨酸底物，直到氧通量增加并稳定下来。按键盘上的 F4 键并输入试剂名称以标记事件。加入ADP耦合线粒体呼吸链，等待氧通量的增加和稳定。
然后加入琥珀酸酯并测量氧通量。为了抑制ATP合酶，加入寡霉素并检查氧通量是否降低。红线稳定后，使用 0.25 微摩尔 FCCP 解耦线粒体电子转移，直到达到最大耗氧量，红线的上升证明了这一点。
接下来，加入鱼藤酮复合物I抑制剂，等待氧通量的降低和稳定。然后加入丙二酸复合物II抑制剂并测量氧通量。最后，加入抗霉素复合物III抑制剂并等待降低，然后增加并稳定氧通量。
单击GraphPad Prism软件，从图形中提取氧通量值。OXPHOS CI是指添加ADP后的氧通量值。然后使用给定的公式计算 OXHPOS CII。
使用以下公式，计算解偶联剂和抑制剂的 ETS CI 和 CII 氧值。然后计算 ATP 合成作为 OXPHOS 和 LEAK 之间的差值。最后，通过LEAK比率计算OXPHOS以确定呼吸控制比率。
PINK1 B9 无效果蝇的 OXHPOS CI 和 OXPHOS CI 和 CII 状态的氧通量均显著降低。与对照苍蝇相比。此外，PINK1 B9 空果蝇的 ETS CI、ETS CII 和 ETS CI 和 CII 状态中的氧通量较低，表明与对照果蝇相比，电子转移系统受损。
电子通量的破坏会影响 OXPHOS 过程，导致 PINK1 B9 空蝇中的 ATP 合成减少。无效果蝇呼吸控制率的降低表明线粒体解偶联，表明线粒体在利用氧气和产生ATP方面的效率较低。
