Quantification of mRNA in TMEM200A siRNA Transfected Stomach Adenocarcinoma Cells

首先，用 TMEM200A siRNA 转染胃腺癌细胞并孵育两天。然后，从孔中丢弃细胞培养基，并用一毫升PBS轻轻洗涤细胞两次。使用RNA分离试剂盒分离细胞的总RNA。

按照制造商的说明，使用cDNA合成试剂盒估计RNA浓度并用1μgRNA合成cDNA。现在，在 10 μL 反应混合物中对 cDNA 的 10 倍稀释液进行定量 RTPCR。使用实时PCR检测系统添加引物和定量PCR预混液。

使用此处所示的定量PCR反应条件，并使用双δ CT技术确定每个基因的相对表达。与 GES-1 细胞系相比，HGC-27 细胞系显着过度表达TMEM200A蛋白和 mRNA 转录物。TMEM200A 在人胃癌细胞 SGC-7901 中的差异 mRNA 表达高于 GES-1 细胞。