首先，用TMEM200A Si-RNA转染胃腺癌细胞并孵育两天。然后，从孔中丢弃细胞培养基，并用一毫升PBS轻轻洗涤细胞两次。将细胞置于冰上，加入 150 微升预冷的放射免疫沉淀测定裂解缓冲液。
使用塑料细胞刮刀，小心地将粘附的细胞从培养皿上分离出来，并将细胞溶液轻轻地转移到预冷的微量离心管中。然后，将细胞裂解物以 1.5 x 10 的升温离心至 4 G 的次方，在 4 摄氏度下离心 10 分钟，并将上清液转移到新的 1.5 毫升微量离心管中。使用 BCA 蛋白检测试剂盒，按照制造商的说明确定蛋白质含量。
将每个样品中的30克蛋白质加载到10%SDS-PAGE凝胶上。将凝胶在 80 伏下运行 0.5 小时，然后在 1.5 伏下运行 120 小时。接下来，将蛋白质从凝胶转移到 45 微米 PVDF 膜上，以 300 毫安的恒定电流持续 1 至 1.5 小时。
将PVDF膜放在振荡器上，循环三次，每次五分钟。摇匀后，将TBST加入容器中，蛋白质面朝上。将膜在室温下置于封闭缓冲液中 30 分钟。
用TBST清洗膜三个周期，每个周期10分钟。将膜与一抗在四摄氏度下孵育过夜。用TBST洗涤膜3次后，加入兔或小鼠二抗，并在室温下孵育1小时。
然后，将 ECL 基板添加到 PVDF 膜上 30 秒，并使用成像系统检测信号。与未转染的细胞相比，转染 Si-RNA 的胃癌细胞 HGC-27 的TMEM200A效率显着降低。TMEM200A Si-RNA显著抑制上皮间充质转化中的相关蛋白，影响AKT在磷酸肌醇3激酶信号通路中的磷酸化。
