Extracellular Vesicle (EV) Isolation from Human Urine Samples Using the EVtrap Approach

首先，从健康个体身上收集尿液样本。在 12 毫升锥形管中离心 15 毫升样品，以消除大凋亡体中的细胞碎片。然后，将 10 毫升上清液转移到新鲜的 15 毫升管中。

向样品中加入一毫升上样缓冲液和 200 微升 EV 捕集珠浆。将样品在室温下孵育 30 分钟，首尾对端旋转。要沉淀样品，将 15 毫升锥形管放在磁性分离器架上。

小心地除去上清液，并将珠子重新悬浮在一毫升洗涤缓冲液中。然后，将悬浮液转移到 1.5 毫升微量离心管中，轻轻移液以重新悬浮细胞外囊泡或 EV 结合的珠子。将微量离心管放在 1.5 毫升管的磁选机架上。

使用P200移液管，小心地吸出上清液。现在，用一毫升洗涤缓冲液洗涤珠子，然后在室温下用一毫升PBS洗涤两次。将珠子与 100 微升新鲜制备的 100 毫摩尔三乙醇胺孵育五分钟。

使用1.5毫升微量离心管磁选机架，收集含有EV的溶液。混合浸出的溶液后，使用四摄氏度的真空离心浓缩器干燥洗脱液。